184720. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-lipotropin hormon fragmens peptid származékok és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 hidrátot adunk, majd a keveréket szobahőmérsékleten 18 órán át keverjük, A keletkező szilárd anyagot kiszűrjük és 100 ml vízben keverjük. A szilárd anyagot ismét kiszűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. Kitermelés: 3.5 g. Olvadáspont: 158 -159 °C. Rf (CHCI3 :MeOI 1/8:2) = 0,55 Si02-on. 2. Z-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser-Gln-Thr-Pro-leu-Val-Thr-Ieu-OtBu 1,42 g Z-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-N2 fl3-at 10 ml DMF-ben feloldunk. Ezt követően az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és hozzáadunk 1,62 ml 2,3 n DMp-es sósavoldatot, majd 20 °C-ra hűtjük, és 0,27 ml I, A. N. -t adunk az elegyhez. A keveréket 15 és —20 °C között keverjük 5 percig. Ezt követően az elegyhez O, 45 ml N.E.M-et és 10 ml DMF-ben levő 1,57 g Fl-Ser-GIn-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OtBu (F.l.) oldatát adjuk. A reakcióelegy pH-ját 7,0—7,2-re állítjuk és körülbelül 0 °C-on állni hagyjuk három napon át. Az elegyet ezután 310 ml vízbe csepegtetjük. A keletkező szilárd anyagot elkülönítjük, vízzel mossuk és szárítjuk. Kitermelés: 2,29 g. Olvadáspont: 185-187 °C (bomlással). Rf (CHC.I3 :MeOH/8:2) = 0,35 Si02-on. 3. H-Tlir-Ser-Glu-Lys-Ser-GIn-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OH 2,26 g (1,37 mmól) Z-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OtBu-t 30 ml DMF- ben oldunk, majd szénhordozós palládiumkatalizátor hozzáadása után hidrogént vezetünk át mindaddig, míg a széndioxid fejlődése már nem figyelhető meg. A katalizátor kiszűrése után az oldatot be pároljuk. A hidrogénezett pepiidet 30 ml 90%-os TFA-hoz adjuk, és néhány csepp anizolt adunk hozzá. Az elegyet szobahőmérsékleten egy órán át keverjük, majd éterbe öntjük. A terméket Bu:Ac:Wa/4:l :5 oldószer-rendszerben végzett ellenáramú megoszlással tisztítjuk. Az összegyűjtött frakciókat bepároljuk, tercier-butanol és víz 1:1 arányú keverékében (50 ml) feloldjuk, majd acetát-formában lévő ioncserélőt adunk az elegyhez, és fél óráig keverjük. Az ioncserélőt kiszűrjük, és a szűrletet íiofilezzük. Kitermelés: 1,02 g. Rf (Bu:Py:Ac:Wa [2:3/4:1/4:1]) = 0,17 Si02-on. 6. példa Az 5. példában ismertetett módszerrel azonos módon állítjuk elő az alábbi peptideket acetátsó formájában: H-DThr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OH, Rf = 0,19, fl-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-D-Leu-üH, Rf = 0,18 H-Thr-Ser-Gl-Ly-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu- NUCIlj, Rf = 0,26, M-Tlu-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OMe, Rf = 0,34, H-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phc-Lys-OH, Rf = 0,15, M-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Glu-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OH, Rf = 0,16, ll-Thr-Scr-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-MeLeu-Otl, Rf = 0,23, H-Ala-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thrleu-Phe-Lys-OU, Rf = 0,21, Dezamino-Thr-Ser-Glu-l.ys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-011, Rf = 0,30, Bu;Py:Ac:Wa (2:3/4:l/4:l) oldószer-rendszert Si02-on alkalmazva. 7. példa H-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-leu-Val-Thr-Leu-OH-acetátsó 1. Z-Lys(Boc)-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu- OtBu 1,35 g Z-Lys(Boc)-ONp-t (2,7 mmól) és 2,42 g H-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OtBu-t (2,64 mmól) - előállítása az F. 1. pont szerint - oldunk 35 ml DMF-ben. Szobahőmérsékleten 18 órán át végzett keverés után a reakcióelegyet szárazra pároljuk. A maradékot ezután 25 ml MeOH-ban feloldjuk és az oldatot 150 ml éterbe öntjük. A szilárd anyagot elkülönítjük, éterrel mossuk, és szárítjuk. Kitermelés: 3,2 g. Olvadáspont: 197 -200 °C. Rf (CHCI3 :MeOH/8:2) = 0,58 Si02 -on. 2. H-Lys(Boc)-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OtBu Az 1. pont alatt nyert védett pepiid 1,0 g-ját (0,78 mmól) DMF-ben feloldjuk és szénhordozós palládiumkatalizátor (10%) segítségével az 5. példa 3. pontjában leírtak szerint lúdrogénezzük. Kitermelés: 0,7 g. Olvadáspont: 197- 198 °C (bomlással). Rf (Cllda :MeOH:Wa/70:30:5) = 0,42 SiO -on. 3. A 2. pont szerint nyert peptid 0,65 g-ját 6,5 ml 90%-os TFA-hoz adjuk, majd cseppenként amizolt adunk hozzá. Az elegyet szobahőmérsékleten 45 percig keverjük, majd szárítjuk. A szilárd anyagot tercierbutanol és víz 1:1 arányú keverékének 15 ml-ében feloldjuk és acetát-formában lévő ioncserélőt adunk hozzá. Ezután a keveréket fél órán át keverjük. Az ioncserélőt kiszűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. Kitermelés: 540 mg. A terméket Bu:Ac:Wa/4:l :5 oldószer-rendszerben végzett ellenáramú megosztással tisztítjuk. Kitermelés: 320 mg. Rf (BuPy:Ac:Wa [2:3/4:l/4:l])= = 0,19 Si02 -on. 8. példa A 7. példában leírtakkal azonos módon a következő peptideket állítjuk elő acetátsó formájában: H -Lys -Se r -Gin -Thr -Pr o -Le u-V al-Thr -Le u-OMe (Lys* F.5.) Rf = 0,26, H -Lys -Se r -Gin -Th r -Pro -Le 11 - Val-Thr - Le u -Ph e - Ly s - -OH (Lys+F. 6.) Rf = 0,16, H-Lys-Ser-Gln-Tíu-Pro-LeuVal-Tlir-D-Leu-OH (Lys+ F. 3.) Rf = 0,21. Az Rf értékeket Bu J’y :Ac:Wa(2:3)4:l/4:l) oldószer-rendszerben Si02-on határozzuk meg. 9. példa H-Glu-Lys-Ser-Gln -Thr-Pro-Le u-Val-Thr-Le u-OH- acetátsó 1. Z-Glu(OtBu)Lys(Boc)-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OtBu 843 mg Z-Glu(OtBu)-OH-t és 676 mg HOBt-t 10 ml DMF-ben oldunk. -22 °C-ra történő hűtés után 2,82 g H-Lys(Boc)-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-OtBu-t (7. példa 2. pontja szerinti) és 2 mi DMF-ben 184.720 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8
