184623. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 4-dazacetoxi-4-szubsztituált-indol-dihidroindol-származékok előállítására
1 184 623 2 grafáljuk. A frakciókat 10 ml-ként vesszük. A 7-12 frakciókat egyesítjük, az oldószert ledesztilláljuk, így 55,1 mg világossárga szilárd anyagot kapunk, mely vékonyrétegkromatográfiával lényegében egy foltot mutat. Etanolból átkristályosítva 28,8 mg pelyhes fehér 5 kristályos anyagot kapunk. Az eljárással előállított 4- dezacetoxi-4a-hidroxi-vinblas/.iia a következő fizikai jellemzőkkel rendelkezik. PMR-spektrum (100 MHz): S (C0C13), 8,23 (bs, 1, indol N—H), 7,4,3—7,61 (m, 1, 10 Cn-H), 7,01-7,22 (m, 3, C„<_14'-H) 6,59 (s, 1, C14-H), 6,05 (s, 1, C17-H), 5,o6-5,77 (m, 2, C6i7-H), 4,02 (d, J = 3, 1, C4~H), 3 88 (s, 3, C,s—OCH3), 3,75 (s,3,C3 - CO2CH3). 3,73 (bs, 1, C2-H), 3,59 (s, 3, C18'~C02CH3), 2,85 (s, 3, N-CH3), 0,98 15 és 0,87 (2t, J = 7,6, C21,2i'-H). Infravörös-spektrum : KCHC13) = 3465, 3005, 1724, 1616, 1500, 1458, 1432 cm 1. Ultraibolya-spektrum: 20 X(EtOH) = 214 (4 • 46X104), 288, 296 nm. Tömegspektrum: m/e 768 (M+), 737, 709, 651,543, 154. 4. Példa l-Dezmetil-4-dezacetoxi-l-formil-4o.-hidroxí-vinblaszíin 76,8 mg 4-dezacetoxi-4a-hidroxi vinblasztint 10 ml acetonban oldunk, és. hozzáadunk 43,5 pl savoldatot, 30 melyet 19,9 ml vízből és 2,5 ml 18 m kénsavból készítünk. A sav hozzáadására azonnal csapadék képződik. A savas reakcióelegyet —60 °C hőmérsékletre hűtjük, és 4 perc alatt 90 mg króm-trioxidot, 1 ml jégecetet és 0,1 ml vizet tartalmazó oxidáló oldatot csepegtetünk 35 hozzá. A reakcióelegyet —60 °C és —50 °C közötti hőmérsékleten 20 percig keverjük, majd —70 °C hőmérsékletre hűtjük, Az elegyhez 2 ml 14 n vizes ammóniumhidroxidot adunk, és 50 ml jeges vízre öntjük. A vizes fázist 3-szor kloroformmal extrabáljuk, majd az egyesi- 40 tett extraktumokat hígított nátrium-hidrogén-szulfitoldattal mossuk és szárítjuk. Az oldószer ledesztillálásával 61,6 mg világossárga szilárd maradékot kapunk. A maradékot 20 g Woelm I aktivitású szilikagélen kromatografáljuk. A kromatogramot 30 ml részletekben 1 :1 45 metilén-diklorid :etil-acetát elegyben eluáljuk, melyek 4, 6, 9, 13,5, 20 és 30% metanolt tartalmaznak. Az eluálással 10 ml-es frakciókat veszünk le. A 15—20 frakciókat egyesítve 34,8 mg fehér szilárd l-dezmetil-4- dezacetoxi-l-formil-4a-hidroxi-vinblasztínt kapunk. 50 5. Példa 4-Dezacetoxi-4a.-acetoxi-vinblasztin gg 440 mg 4-dezacetoxí-4a-hidroxí-vínblasztin, 6 ml ecetsavanhidrid és 6 ml piridin elegyét szobahőmérsékleten 17 óra hosszat állni hagyjuk. Az illó alkotórészeket ezután vákuumban, 30 °C hőmérsékleten eltávolítjuk. A képződött olajos 4-epi-VLB-t metilén-dikloridban 60 oldjuk, és a szerves fázist hideg vízzel mossuk. A vizes fázist elválasztjuk és metilén-dikloriddal extraháljuk. Ezt a metilén-dikloridos extraktumot az eredeti szerves fázishoz adjuk, és az egyesített oldatokat szárítjuk. Az oldószer Jedesztillálásával 4-epi-VLB maradékot kapunk, 65 melyet 20 g szilikagélen (I aktivitású) kromatografálunk, és növekvő mennyiségű, 9, 13,5, 30 és 45% metanolt tartalmazó 1:1 metilén-diklorid : etil-acetát eleggyel eluálunk. Vékonyréteg-kromatográfiával vizsgálva a kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és az oldószert eltávolítjuk. A kapott maradék sárga szilárd anyag mely a következő fizikai jellemzőkkel rendelkezik; PMR-spektrum (100 MHz): 5(CDC1,) 8,41 (széles s, 1, indol N-H), 7,39-7,58 (m 1, Cn-H), 7,0-7,3 (m, 3, C12'-i4-H), 6,58 (s, 1, C14-H), 6,03 (s, 1, C17-H) 5,49-5,82 (m, 2, C6 7-H), 4,56 (s, 1, C4-H), 3,79 (s, 3, C15-OCH3), 3,75 (s, 3, C3-C02CH3), 3,60 (s, 3, C18'-C02CH3), 2,90 (s, 3, N-CH3), 1,25 és 0,90 (2t, J = 7, 6, C2i ,21H). Infravörös-spektrum: u(CHCl3) => 3450, 3000, 1730, 1225 cm'1 Ultraibolya-spektrum: X(EtOA) = 214 (4,46X104), 288, 296 nm. Tömegspektrum: m/e 810 (M*), 779, 751,469, 295, 154. A találmány szerinti vegyületek a kínai hörcsög petefészek sejtjeiben mitózisos inhibitorok. Különösen a 4-dezacetoxi-4a-hidroxi-vinbiasztin közelítőleg megfelelő mitózisos gátlást mutat, mint a vinblasztin-szulfát, vagy a 4-dezacetil-vinblasztin, 0,01 pg/ml-nél alacsonyabb aktivitással. A találmány szerinti V általános képletű vegyületek, tumorellenes szerek. Ezt bizonyítja az egerekbe átültetett tumorral szembeni aktivitás. Ennek meghatározására, feljegyeztük a gyógyszer intraperitoneális adagolását az adott dózisszinten a tumor beültetése után 7-10 nappal, vagy másként, a beültetés utáni első, ötödik és kilencedik napon. A következő 3. táblázat több kísérlet eredményét adja meg, melyben az egerekbe átültetett tumort a találmány szerinti vegyületekkel eredményesen kezeltük. A táblázat első oszlopa a vegyület nevét, a második oszlop a transzplantált tumort, a harmadik oszlop a dózisszintet, vagy a dózisszint-tartományt, és az adagolási napok számát, és végül a negyedik oszlop a tumor növekedésének %-os gátlását, vagy a túléiési idő elhúzódási %-át mutatja, például B16. (A GLS a Gardner limfo-3. Táblázat Vegyület Tumor mg/kg X nap Százalékos gátlás vagy a túlélési idő elhúzódása 4-dezaceíoxi-4a-6,0X10 100 (7 nap) toxikus hid'oxi-vinbiasz-GLS 3,0X10 91 (7 nap) 78 (11 nap) fin 1,5X10 35 (7 nap) 25 (11 nap) B16 9,0X3 toxikus 6,0X3 90 3,0X3 65 755 3,0X10 38 l-dezmetii-4-dezacetoxi-l-formil- 4a hidroxi-vinkrisztin-szulfűt 6,0X10 100 (7 nap) toxikus GLS 3,0X10 100(7 nap) 100(11 nap) 1,5X10 36 (7 nap) 29 (11 nap) határozatlan túlélő 5
