184612. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szomatosztatin-tipusú ciklopeptidek előállítására
1 184 612 2 A találmány szerinti eljárással a végtermékeket az izolálás jellege szerint bázisok vagy savaddíciós sók alakjában kapjuk meg, amelyeket utólag önmagában ismert módon egymássá átalakíthatunk. Az említett komplexek képzését ugyancsak ismert, vagy ezekhez hasonló eljárásokkal végezzük. A szervetlen anyagokkal, így a nehezen oldható fém-, például alumínium- vagy cinkvegyületekkel képezett komplexeket előnyösen az ACTH-ra kidolgozott eljáráshoz hasonlóan állítjuk elő, például úgy, hogy a pepiidet, az illető fém oldható sójával, például cinkkloriddal vagy cinkszulfáttal reagáltatjuk, és alkálifémfoszfáttal és/vagy -hidroxiddal kicsapjuk. A szerves anyagokkal, így polioxizselatinnal, karboximetilcellulózzal, polivinilpirrolidonnal, polifioretinfoszfáttal, poliglutaminsawal stb. képezett komplexeket úgy állítjuk elő, hogy ezeket az anyagokat a pepiiddel vizes oldatban keverjük. Hasonló módon állíthatunk elő oldhatatlan vegyületeket alkálifémpolifoszfátokkal is. A II általános képletű vegyületek újak. Ezeket a vegyületeket előnyösen úgy állítjuk elő, hogy egy megfelelő H-[II']-C ül általános képletű lineáris peptidet — ahol II' a II általános képletű pepiidnek megfelelő csoport, amelyben az amidkötés a peptidgyűrű két tetszőleges szomszédos aminosavcsoportja között meg van szakítva, és C szabad hidroxilcsoport, aktiválócsoporttal átalakított hidroxilcsoport, vagy az -NH—NH2 hidrazinocsoport — ciklizálunk. A III általános képletű lineáris peptidek közül előnyösek. azok, álról a II’ csoportban az X és Y csoportok közűi legalább az egyik végcsoport-aminosav. Ezek az előnyös kiindulási vegyületek az alábbi általános képletűek: H-X-Y-R-Phe-Phe-trp-Lvs(A)-Thr(B)-Phe-C Illa H-Y-R-Phe -Pb e-t rp- Ly s ( A)-Thr (B)-Phe- X-C Illb és elsősorban H-R-Phe-Phe-trp-Lys(A)-Thr(B)-Phe-X-Y-C lile ahol A, B, C, trp, R, X és Y jelentése a fenti. A legelőnyösebbek azok a Illa—c általános képletű vegyületek, ahol A amino-védőcsoport, elsősorban acidolízissel lehasítható védőcsoport, B hidroxil-védőcsopoit, elsősorban acidolízissel lehasítható hidroxil-védőcsoport és C szabad hidroxilcsoport. A C szimbólummal jelzett funkciós csoport kiegészíti a C-termináiis aminosavesoport karbonilcsoportját, és ezzel együtt szabad karboxilcsoportot, aktivált észtercsoportot, illetve karbazoilcsoportot képez. A hidroxilcsoportot módosító aktiváló-csoport olyan csoport, amely az aktivált észtert elsősorban N-hidroxiszukcinimiddel, 1-hidroxi-benztriazollal, N,N'-diciklohexil-izokarbamiddal, 2,4,5-triklórfenollal, 2-nitro-fenollal, 4-nitro-feno!lal, pentaklórfenollal vagy pentafluorfenollal képezi, de megfelelnek más ilyen jellegű, a peptidkémiából ismert aktiváló-csoportok is [Houben- Weyl, Band 15/11], A III általános képletű lineáris peptidek találmány szerinti ciklizálását az amidkötés képzéséhez szokásos kapcsolási eljárásokkal végezzük. Ilyenkor azonban a 4 peptid kiindulási anyagot igen kis koncentrációban alkalmazzuk, hogy a kapcsolódás az intermolekuláris polikondenzáció elkerülésével az intramolekuláris ciklizálás javára menjen végbe. A lineáris pepíideket előnyösen kb. 1 -10~5— 1 -10~3 mólos, előnyösen kb. 1 • 10-4 mólos koncentrációban alkalmazzuk, ami megfelel kb. 0,01-1,0 súly/térfogat%, előnyösen 0,1 sú!y/térfogat% koncentrációnak. A megfelelő hígítást a reakciókeverékben kezdetben is beállíthatjuk, vagy a kiindulási anyagot és adott esetben a többi reagenst lassan becsepegtetve a reakciókeverékbe, a hígítást folyamatosan végezhetjük. A ciklizálást előnyösen végezhetjük egy fenti kiindulási koncentrációban, ha a) egy III általános képletű kiindulási anyagot — ahol C szabad hidroxilcsoport és a Hzincsoport e-amino-csoportja és a treonincsoport hidroxilcsoportja védett - adott esetben aktív észtert képező komponens jelenlétében egy karbodiimiddel kezelünk, vagy b) egy III általános képletű kiindulási anyagot — ahol C aktivált észterré átalakított hidroxilcsoport, és az amino-végcsoport protonált formában van jelen, és legalább a Hzincsoport e-amino-csoportja védett — szerves bázissal reagáítatunk, vagy c) egy III általános képletű kiindulási anyagot - ahol C az —NH-NH2 csoport és legalább a Hzincsoport e-aminocsoportja védett — először savas körülmények között salétromossavval, vagy ennek rövidszénláncú alkilészterével kezelünk, majd egy fent említett kis koncentrációban feleslegben vett szerves bázissal ciklizálunk. A ciklizálást megfelelő oldószerben végezzük, ez lehet például dioxán, tetrahidroíurán, acetonitril, piridin, dimetilformamid, dimetilacetamid, dimetilszulfoxid, N-metil-pirroiidon, hexametilfoszfortriamid, valamint kloroform és metilénklorid és ezek keverékei. Az a) eljárásváltozatnál a ciklizálást karbodiimiddel, előnyösen N.N’-diciklohexil-karbodiimiddel végezzük, amit előnyösen feleslegben alkalmazunk. Ebben az esetben a szabad karboxilcsoporttal rendelkező III általános képletű kiindulási anyag primer átalakul a diciklohexilizokarbamiddal,, illetve egy analóg izokarbamiddal képezett aktív észterré, és ez az in situ képződött aktív észter azonnal továbbreagál. Egy aktív észter intermedier képzését kétségkívül elősegíti egy aktívészter képző komponens, mint segédreagens hozzáadása. Érre a célra alkalmasak a peptidkémiában szokásos aktívészter-képző komponensek, így főképpen a 2,4,5-triklórfenol, 2- vagy 4-nitrofenol, pentaklór- vagy pentafluorfenoi, és mindenekelőtt az N-hidroxi-vegyületek, amelyek közül mint különlegesen előnyöst meg kell említeni az N-hidroxi-szukcinimidet, N-hidroxi-piperidint és elsősorban az 1-hidroxi-benztriazolt. Ennél az eljárásváltozatnál a hőmérséklet általában 0-70 °C, előnyösen 35—55 °C. A b) eljárásváltozatnál, amit kész aktív-észterekkel, elsősorban a már említettekkel végzünk, a ciklizálás spontán bekövetkezik, amikor az amino-végcsoportot a szerves bázissal protonmentesítjük. Az alkalmazott bázisok előnyösen kvaternerek, vagy elsősorban tercier aminok, például trietilamin vagy N-etil-morfolin. A reakcióhőmérséklet előnyösen 10—30 °C, főképpen szobahőmérséklet. A c) eljárásváltozatnál az első fázist, vagyis a savazid képzését salétromossavval, vagy ennek egy' észterével, előnyösen a kiindulási anyagok lényegesen nagyobb koncentrációjával végezzük, mint az ezt követő ciklizá!5 10 15 20 25 30 35 4U 45 50 55 60 65
