184612. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szomatosztatin-tipusú ciklopeptidek előállítására
1 184612 2 benzotriazol 25 ml acetonitriilei készített oldatához —5°-on 0,86 ml N-metil-morfolint és 1,34 g DCCI-et adunk, és a reakciókeveréket 16 órán át a fenti hőmérsékleten állni hagyjuk. A diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, a szűrletet etilacetáttal hígítjuk, hígított sósavval és nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk, és vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk. Az oldatot bepároljuk. az így kapott maradékot kovasavgél oszlopon etilacetát-hexán (7:3)-(9:1) keverékekkel kromatografáljuk. A vékonyrétegkromatográfiásan tiszta frakciókat szárazra pároljuk. Vékonyrétegkromatogram: 157A rendszer: Rf = 0,38. 15.4 művelet Z-A sn-Ph e-Phe-(D- Trp )-Lys (SEOC)-Ihr-OMe 1,31 g Z-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr-OMe metanol-víz (95 :5) keverékének 30 ml-ével készített oldatát 130 mg 10%-os palládiumozott/szén katalizátor jelenlétében 2 órán át hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, a szűrletet bepároljuk, és dimetilformamiddal nagyvákuumban még kétszer bepároijuk. Az így kapott oldathoz, amely 3,5 mi dimetilformamidot tartalmaz, 1,01 g Z-Asn-Phe- Phe-OH-t (1.5A művelet) és 330 mg N-hidroxi-benzoltriazolt adunk, a reakciókeveréket -5°-ra lehűtjük, 440 mg DCCI 0,5 ml dimetilformamiddal készített oldatával kezeljük, 15 órán át 0°-on állni hagyjuk, és a 7.1 művelet szerint feldolgozzuk. Vékonyrétegkromatogram: 157A rendszer: Rf = 0,45. 15.5 művelet Z-A sn-Phe-Phe-(D- Trp j-Lys (SEOC)- Tnr-hidrazid 2,0 g Z-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(SEOC)-Thr-OMe 6 ml dimetilformamiddal készített oldatához szobahőmérsékleten 0,85 ml hidrazinhidrátot adunk. A reakciókeveréket 2,15 óra múlva a 14.3 művelet szerint feldolgozzuk. A terméket vékonyrétegkromatográfiásan nem tudjuk ellenőrizni, mivel rendkívül oldhatatlan. 15.5A művelet Trt-Tyr(But)-OH- dietilammóniumsó 4,0 g H-Tyr(But)-OH 50 ml kloroformmal készített oldatához 6,7 ml vizet, 6,7 ml dietilamint és jeges hűtés közben 30 perc alatt 7,05 g trifenilklórmetánt adunk. További 1,5 óra elteltével a vizes fázist elkülönítjük, a kloroformos oldatot 4%-os vizes díetilamín-oldattal kétszer és telített nátriumklorid-oldattal kétszer kirázzuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot éter-petroléter keverékéből kristályosítjuk, a termék olvadáspontja 141-145°. Vékonyrétegkromatogram: toluol-aceton (1 :1), Rf = 0,48. 15.5B művelet Trt-Tyr(But)-ONSu 4,7 g Trt-Tyr(But)-OHdietilammóniumsót (15.5A művelet) jeges hűtés közben 100 ml etilacetáttal, 10 ml 0,5 mólos káliumszulfát-oldattal és 10 ml káüumhidrogénszulfát-oldattal kirázunk. Az etilacetátos oldatot az alsó fázis elválasztása után vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és az oldószert vákuumban kíméletesen ledesztilláljuk. A maradékot 50 ml dimetilformamidban feloldjuk, az oldathoz 1.1 g N-hidroxiszukcinimídet és 0°-on 1,94 g DCCI-et adunk, és 15 órán át +5°-on állni hagyjuk. A diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, a szűrletből a nyersterméket vízzel kicsapjuk, és kovasavgél oszlopon kloroformmal kromatografáijuk- Azokat a frakciókat, amelyek a vékonyrétegkromatogram szerint a terméket tartalmazzák, egyesítjük, és a terméket metanolból átkristályosítjuk. Az olvadáspont 163-164°. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-etilacetát (1:1), Rf="0,53. 15.5C művelet Trt-Tyr(But)-Gaba-OBzl 580 mg Trt-Tyr(But)-ONSu (15.5B művelet) és 730 mg H-Gaba-OBzl • p-toluolszulfonát (1 7A művelet) 1 ml tiszta kloroformmal készített szuszpenziójához 0,77 ml N-metil-morfolint adunk, és a keveréket 4 napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A keveréket etilacetáttal hígítjuk, és az így kapott oldatot jeges hűtés közben 0,2 mólos káliumhidrogénszulfát-oldattal és vízzel kirázzuk, a szerves fázist vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és az oldószert ledesztilláljuk. A nyersterméket kovasavgélen kromatografáíjuk, a tiszta terméket etilacetát-hexán (1:1) keverékével eluáljuk, és a szokásos módon izoláljuk, Vékonyrétegkromatogram: toluol-aceton (8 :2), Rf = 0,5. 15.5D művelet H-Tyr(Bui )-Gaba-OBzl■ hidroklorid 620 mg Trt-Tyr(But)-Gaba-OBzl (15.5C művelet) trifluoretanol-víz (9:1) keverékének 20 ml-ével készített oldatához automata titrálóberendezéssel 3,5 pH-értéken a fenti oldószereleggyei készített 1,2 n sósavat adunk, amíg fogyást már nem észlelünk. A reakcíókeverékhez 20 ml terc-butanolt adunk, és vákuumban bepároljuk. Ezt a műveletet még kétszer megismételjük, és a visszamaradó terc-butanolt liofilizálássai eltávolítjuk. A trifenilkarbinol eltávolítása céljából a liofilizátumot víz és éter között megosztjuk, és a vizes oldatot liofilizáljuk. Vékonyrétegkromatogram: 157B rendszer: Rf = 0,5. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 22
