184612. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szomatosztatin-tipusú ciklopeptidek előállítására
1 184 612 2 líofilizáíássa! eltávolítjuk. A terméket izopropanol-éter keverékéből átkristályosítjuk. Vékony rétegkromatogram: 157C rendszer: Rf = 0,68. 14.4 művelet SEOC-A sn -Phe-Phe-(.D-Trpj-Lys (Boc)-7hr-[Phe(J)]-Gaba-OTmse 10 320 mg SEOC-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thrhidrazid (14.3 művelet) 2 ml dimetilformamiddal készített oldatához —(15—20)°-on 0,14 ml 5,3 n dioxános sósavat és 0,04 ml terc-butilnitritet adunk, és a reakció- 15 elegyet 15 percig ezen a hőmérsékleten keverjük. Ezután —25°-on hozzáadjuk 193 mg H-[Phe(J)]-Gaba- OTmse hidroklorid (14.3C művelet) 0,5 ml dimetilformamiddal és 0,18 ml N-metil-morfolinnal készített oldatát, a reakciókeveréket lassan 0°-ra melegítjük, és 20 16 órán át ezen a hőmérsékleten tartjuk. Víz becsepegtetésével a terméket kicsapjuk, és metanollal és acetonitrittel eldörzsölve tisztítjuk. Vékony rétegkromatogram : kloroform-triíluoretanol-metanol (80:15:5), 25 Rf = 0,43. 14.5 művelet 30 H-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr-[Phe(J)]-Gaba-OH 324 mg SEOC-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr[Phe(J)]-Gaba-OTinse (14.4 művelet) 2 ml dimetilformamidda! készített oldatához 12,3 ml 0,34 mólos 35 dimetilszulfoxidos tetraetilammóniumfluoridot adunk, és a reakeiókeveréket 1,5 órán át 30°-on állni hagyjuk. Ezután 0,41 ml 1 n sósavat tartalmazó 40 ml jéghideg vizet a reakciókeverékbe csepegtetve a terméket kicsapjuk, szárítjuk, és így használjuk a következő művelethez. 40 Vékonyrétegkromatogram: 157. rendszer: Rf = 0,5. 14.6 művelet 45 r— ---------------—----------------------------------------------] — Asn-Plie-Plie-(D-Trp)-Lys(Bocj-Thr-[Phe(Jj]-Gaba — 258 mg H-Asn Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr[Phe(J)]-Gaba-OIl, 300 mg n-hidroxi-benzotriazol és 410 mg DCCI 200 ml dimetilformamiddal készített oldatát 20 órán át 50°-on tartjuk. A reakciókeveréket a 8.2 műveletben leírtak szerint feldolgozzuk, K = 1,1. gg Vékonyrétegkromatogram: 157A rendszer: Rf = 0,22. L Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(SEOC)-Thr-Tyr(But)-Gaba -1 2 ml dimetilformamiddal készített oldatához 0,7 ml 2,1 mólos dimetilszulfoxidos tetrabutilammóniumfluoridot adunk, és a reakciókeveréket 20 órán át 30°-on állni hagyjuk. Ezután a keverékhez 20 ml 1 n ecetsavat és 50 ml etilacetátot adunk, a vizes fázist elkülönítjük, a szerves fázist kevés vízzel még kétszer extraháljuk, és az egyesített vizes oldatokat vákuumban bepároljuk és liofiiizáljuk. A maradékot, amely a termék és tetrabutilamnióniumfluorid keveréke, preparatív vékonyrétegkromatográfiával kovasavgélen 157C rendszerben szétválasztjuk. A kovasavgélből izolált, még nem egészen tiszta terméket kloroform-széntetraklorid-metanol- 0,05 mólos ammóniumacetát (9 :1 :7 :3) rendszerben 460 lépcsőben ellenáramú megoszlással tisztítjuk. A tiszta terméket (K “ 0,9) a szokásos módon izoláljuk. Vékonyrétegkromatogram (Merck kovasavgél): 257C rendszer: Rf = 0,25. A kiindulási anyagot a következőképpen állítjuk elő: 15.1 művelet Z-(D-Trp)-Lys-OH ■ trifluoracetát 3,4 g Z-(D-Trp)-Lys(Boc)-OH-t (1.3A művelet) jeges hűtés közben triflucrecetsav-viz (9:1) keverékének 34 ml-ébe — amely 0,5 ml 2-merkapto-etanolt tartalmaz — beadagoljuk, és amint feloldódik, még 40 percig 23c-on tartjuk. A reakcióelegybe 400 ml étert és 150 ml hexánt becsepegtetve a nyersterméket kicsapjuk, és 30 ml vízben feloldjuk. Az oldatot szobahőmérsékleten 18 órán át állni hagyjuk, majd liofiiizáljuk, és a maradékot közvetlenül felhasználjuk a következő művelethez. Vékonyrétegkromatogram: 157. rendszer: Rf = 0,35. 15.2 művelet Z-(D-Trp)-Lys(SEOC)-OH 3,0 g Z-(D-Trp)-Lys-OH • trifluoracetát (15.1 művelet) és 1,47 g (2-írimeti]sziiiletil)-(N-hidroxi)-szukcinimidokarbonát (12.7A művelet) 5,2 ml dimetilformamiddal készített oldatához szobahőmérsékleten 0,87 ml trietilamint adunk, és a reakciókeveréket 15 órán át állni hagyjuk. Ezután a keveréket etilucetáttal hígítjuk, sósavval 1-2 pH-értékre savanyítjuk, az etilacetátos oldatot vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfáíon szárítjuk és bepároljuk. A nyersterméket az 1.10 művelet szerinti rendszerben 140 lépcsőben ellenáramú megoszlással tisztítjuk, K = 0,75. Vékony rétegkromatogram : 1570 rendszer: Rf = 0,55. 15. példa 60 15.3 művelet — Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys-Thr-Tyr(But)-Gaba Z-( D-Trp )-Lys (SEOC)-Thr-OMe 3,16 g Z-(D-Trp)-Lys(SEOC)-OH (15.2 művelet), 1,32 g H-Thr-OMe • hidroklorid és 0,95 g N-hidroxi-21 350 mg 65
