184612. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szomatosztatin-tipusú ciklopeptidek előállítására
1 184 612 2 Z-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr-OMe 2,IS g Z-(D-Trp)-Lys(Boc)-OH (1.3A művelet), 0,85 g H-Thr-OMe-hidroklorid és 0,77 g N-hidroxibenzotriazol 16 ml acetonitrillel készített oldatához —5°-on 0,56 ml N-meti!-morfolint és 1,03 g DCCI-et adunk. 15 órán át — 5°-on tartjuk a keveréket, majd a 14.3B művelet szerint feldolgozzuk. A terméket etilacetát-hexán keverékéből átkristályosítjuk, a termék olvadáspontja 120—122°. Vékonyrétegkromatogram: 157A rendszer: Rf = 0,47. 14.1 művelet 14.1 A művelet SEOC-Asn-Phe-Phe-OH 2,24 g Z-Asn-Phe-Phe-OH 40 ml dimetilformamiddal készített oldatához 0,23 g 10%-os palládiumozott/szén katalizátort adunk, és 4 órán át szobahőmérsékleten hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, az oldatot nagy vákuumban kb. 5 ml-re bepároljuk, és ebben a formában dolgozzuk fel. 1,71 g H-Asn Phe-Phe-OH 15 ml dimetilformamidda! készített oldatához 10 ml vizet adunk, és az így kapott szuszpenzióhoz előbb 1,04 g SEOC-ONSu-t, majd automata titráló berendezéssel lassan 2 óra alatt szobahőmérsékleten 2 n nátriumhidroxidot adva 7,5 pH- értéket tartunk A reakciókeverékhez még 1,04 g SEOCONSu-t adunk, és még 4 órán át 7,5 pH-értéken tartjuk. Ezután az oldatból a kevés oldhatatlan anyagot kiszűrjük, a szűrlethez 0—5°-on az elhasznált nátriumhidroxiddal ekvivalens mennyiségű sósavat (kb. 8,0 ml 2 n oldat) adunk, a kivált terméket kiszűrjük, és szárítjuk. A nyersterméket 10 ml metanolból 100 ml éterrel és 10 mi metanolból 80 ml vízzel átcsapjuk. A termék olvadáspontja 176—182° (bomlással). Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rr = 0,30. 14.2 művelet SEOC A sn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys (Boc )- Tkr-OMe 340 mg Z-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr-OMe (14.1 művelet) metanol-víz (9:1) keverékének 15 ml-ével készített oldatát 50 mg 10%-os palládiumozott/szén jelenlétében. 0,2 n, fenti oldószerrel készített sósav hozzáadásával 4,5 pH-értéken hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, és dimetilformamiddal még kétszer bepároíjuk. A visszamaradó oldathoz (összesen 1,5 g) 285 mg SEOC-Asn-Phe-Phe OH-t (14.1A művelet) és 90 mg N-hidroxi-benzotriazolt adunk. A reakciókeverékhez —5°-on 0,056 ml n-metilmorfolint és 123 mg DCCI-et adunk, és 18 órán át — 5°-on állni hagyjuk. A reakciókeverék feldolgozását a 71 művelet szerint végezzük, a nyersterméket vizes trifluoretanolból átkristályosítjuk. Vékonyrétegkromatogram: 157A rendszer: Rf = 0,45. SEOC-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr-hidrazid 355 mg SEOC Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr- OMe (14.2 művelet) 1,1 ml dimetilformamiddal készített oldatához szobahőmérsékleten 0,16 ml hidrazinhidrátot adunk. 2,5 óra múlva a szilárd masszát 5 ml vízzel szétdörzsöljük, a csapadékot leszívatjuk, és a hidrazin tökéletes eltávolításáig vízzel mossuk. A nyersterméket metanollal eldörzsölve egységes terméket kapunk. Vékonyrétegkromatogram: 157B rendszer: Rf = 0,25. 14.3 művelet 14.3A művelet Boc-[Phe(Jj\OH 2,9 g p-jód-L-fenilalanin 10 ml 1 n nátriumhidroxiddal és 25 ml terc-butanoilal készített oldatához 2,4 ml di-terc-butil-dikarbonátot adunk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 3 órán át keverjük, és még 20 órán át állni hagyjuk. A reakcióoldatot víz és hexán között megosztjuk, a szerves fázist eldobjuk, és a vizes fázist jeges hűtés közben megsavanyítjuk. A terméket etilacetátban felvesszük, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A terméket széntetrakloridból kristályosítva tisztítjuk, olvadáspontja 118—120 . Vékonyrétegkromatogram: 157B rendszer: Rf = 0,35. 14.3B művelet Boc-[PhefJ)}-Gaba-OTmse 406 mg H-Gaba-OTmse (12.2 művelet), 782 mg Boc-[Phe(J)]-OH (14.3A művelet) és 306 mg N-bidroxibenzotriazol 5 ml acetonitril és 3 ml dimetilformamid keverékével készített oldatához +5°-on 1 ml dimetilformamidban oldott 412 mg DCCI-et adunk. A reakciókeveréket 20 órán át 5° on állni hagyjuk, majd a kivált diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, a szűrletet etilacetáttal hígítjuk, és hígított sósavval és nátriumhidrogénkarbonát-oldattal! kirázzuk. A szűrletet nátriumszulfáton szárítjuk, bepároljuk, és a terméket hexánból átkristályosítjuk. Az olvadáspont 98- 100°. Vékonyrétegkromatogram: ciklohexán-aceton (7:3), Pv.f = 0,35, 157A rendszer: Rf = 0,68, 14.3C művelet H- [Phe (J )]-Gaba-OTmse.hidroklorld 345 mg Boc-[Phe(J)]-Gaba-OTmse (14.3B művelet) triíluoretanol-víz (9:1) keverékének 0,7 ml-ével készített oldatához szobahőmérsékleten 1,5 ml fenti oldószerre] készített 1,2 n sósavat adunk. 30 perc múlva a keverékhez 10 ml tere butanolt adunk, és vákuumban térfogatának kb. a felére bepároljuk. Ezt a műveletet még háromszor ismételjük, és a maradék terc-butanolt 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 20
