184612. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szomatosztatin-tipusú ciklopeptidek előállítására
1 184 612 ' 2 kb. 0,76 ml reagenst használtunk el. Az oldatot vákuumban bepároljuk, a nyersterméket 1 óráig 30 ml éterrel keverjük, majd leszűrjük. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol (85 :15), Rf = 0,55. 12.7A művelet 2~Trimetilszililetil-N-hidroxi-szukcinimidokarbonát (SEOC-ONsu) 100 g klórhangyasav-N-hidroxiszukcinimidészter és 73,2 g 2-trimetilszilil-etanol 160 ml metilénkloriddal készített oldatához 0 -5°-on 15 perc alatt 62,6 g N-metümorfolint csepegtetünk. A keveréket 0- 5°-on 2 órán át keverjük, majd 1 liter étert adunk hozzá, és 200-200 ml 1 n sósavval, kétszer 200--200 ml vízzel, 200-200 ml 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal kétszer, és 200 -200 ml vízzel háromszor mossuk. A vizes fázisokat 0,5 liter éterrel még exíraháljuk, és az egyesített szerves fázisokat vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk és bepároljuk. A maradékot 360 ml diizopropiléterben űtoldjuk, és a képződött kristályokat kiszűrjük és 150 ml hexánnal mossuk. A termék olvadáspontja 101-102°. 12. 7B művelet SEOC-Asn-OH 2,64 g L-aszparaginből dímetilformamid-víz (6:2) keverékének 80 ml-ével oldatot készítünk, és az oldat pH-érték.ét 0,21 ml 1 n nátriumhidroxid hozzáadásával 7,5-re beállítjuk, majd a pH-érték állandó 7,5-ön tartása közben automata titráJóberendezéssel további mennyiségű 1 n nátriumhidroxidot és 10 ml dimetilformamiddal készitett, 5,19 g SEOC-ONSu (12.7A művelet) oldatát a keverékhez csepegtetjük. 2,5 óra múlva kevés oldhatatlan anyagot kiszűrünk, és a szűrlethez hígított sósavat adunk, amelynek mennyisége az elhasznált 1 n nátriumhidroxidéval (kb. 20 ml) ekvivalens. Az oldatot nagyvákuumban bepároljuk, a maradékot 30 ml hideg vízzel eldórzsöljük és szűrjük. A termék olvadáspontja 144,5-146,5° (bomlással). Vékony ré tegkromatograrn : kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf = Q,15. 12.7C művelet SEOC-Asn-ONSu 1,72 g SEOC-Asn-OH (12.7B művelet) 20 ml etilacetát és 10 ml dinretilformamid keverékével készített oldatához 0,79 g N-hidroxi-szukcinimidet adunk, majd a 0-5°-ra lehűtött oldathoz 1,54 g DCCl-et. A reakciókeveréket 0—5°-on tartjuk 2 órán át, majd a kivált diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, a szűrletet 150 ml etilacetáttal hígítjuk, és 50-50 ml 1%-os oxálsav-oldattal háromszor és 50-50 ml vízzel négyszer mossuk. A szerves fázist vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és bepároljuk. Az így kapott habot további tisztítás nélkül használjuk fel a következő művelethez. Vékonyrétegkromatogram : kloroform-metanol-víz (14 :6 :1), Rf = 0,75. 18 12.7D művelet SEOC-A sn-Phe- OH 0,64 g fenüalanin és 1,44 g SEOC-Asn-OnSu (12.7C művelet) 5 ml dirnetilformamid és 5 ml víz keverékével készített szuszpenziójához fél óra alatt szobahőmérsékleten automata titrálóberendezéssel 1 n nátriumhidroxidot csepegtetünk olyan sebességgel, hogy a pH értékét 7,5-en tartsuk. A kismennyiségű oldhatatlan anyagot kiszűrjük, és a szűrlethez 0-5°-on kb. 4,2 ml 1 n sósavat adunk, amíg az elhasznált nátriumhidroxid mennyiségével ekvivalens. A kivált nyersterméket foszforpentoxid felett szárítjuk, és 40 ml etilacetátból átkristályosítjuk. A termék olvadáspontja 156—158° (bomlással). Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf = 0,33. 12.8 művelet SEOC-A sn-Phe-Phe- [D- Trp (N07)\Lys(Boc)-Thr(But)Phe-GabaOTmse 500 mg HQ H-Phe-[D-Trp(N02)]-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-Gaba-OTrnse (12.7 művelet), 202 mg SEOCAsn-Phe-OH (12.7D művelet), 65 mg N-hidroxi-benzotriazol és 44 mg N-metilmorfolin 5 ml dimetilformamiddal készített oldatát 0°-ra lehűtjük, 116 mg DCCI-et adunk hozzá, és a reakciókeveréket 15 percig 0-5°-on és 6 órán át szobahőmérsékleten tartjuk. A kivált diciklohexílkarbamidot kiszűrjük, a szűrletet nagyvákuumban bepároljuk, a maradékot 20 ml vízzel eldörzsöljük és leszívatjuk. A nyersterméket még 4—4 ml metanollal kétszer eldörzsöljük és leszűrjük. Vékonyrétegkronratogram: kloroform-metanol (85:15), Rf = 0,80, kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf = 0,90. 12.9 művelet H-Asn-Phe-Phe-[D-Trp (N02)]-Lys (Boc)-Tkr(But j- Phe-Gaba-OH 530 mg SEOC-Asn-Phe-Phe-[D-Trp(N02)]-Lys(Boc)Thr(But)-Phe-Gaba-Tmse-t (12.8 művelet) 46,7 ml frissen készített vízmentes 0,15 mólos dimetilformamidos tetraetilammóniumfluorid-oldatban feloldunk, és az oldatot 1 órán át szobahőmérsékleten tartjuk. Ezután az oldatot 0-5°-ra lehűtjük, erélyes keverés közben 0,70 ml 1 n vizes sósavat adunk hozzá, és nagyvákuumban 3 ml-re bepároljuk. A terméket 30 ml víz hozzáadásával kicsapjuk. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf = 0.45. 12.10 művelet L- Asn-Phe-Phe-\D-Trp(N07)]-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-Gaba —' Az 1. példában leírtak szerint a H-Asn-Phe-Phe[D-Trp(N02)]-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-Gaba-OH-t (12.9 5 10 15 20 25 30 35 40 45 5G 55 60 65
