184612. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szomatosztatin-tipusú ciklopeptidek előállítására
1 184 612 2 A kiindulási anyagként alkalmazott védett peptidet a következőképpen állítjuk elő: 6.1. művelet H- \D-Glu{ OBzlj]-OBut. hidroklorid 5,00 g H-[D-Glu(OBzl)]-OH és 40 ml folyékony izobutén keverékét 4 ml tömény kénsavval 40 ml dioxánban zárt edényben, szobahőmérsékleten keverjük, amíg tiszta oldat képződik, és az oldatot 4 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk. A — 20°-ra lehűtött reakciókeveréket 300 ml éter és 203 ml 1 n nátriumhidroxid jéghideg keverékébe öntjük. Az éteres fázist 50- 50 ml vízzel háromszor mossuk. A vizes fázist további 300 ml éterrel még egyszer extraháljuk, majd az egyesített szerves fázisokat vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, vákuumban 10 ml-re bepároljuk, és 0°-on 30 ml 0,7 n metanolos sósavoldattal alaposan átkeveijük. Az így kapott oldatot vákuumban bepároljuk, és a maradékot 20 ml petroléterrel eldörzsöljük, amíg a kristályosodás elkezdődik. A leszűrt terméket, amely az alábbi képletnek felel meg CQ-OBut I HC1 • NH2-CH(CH2)2-CO-OBzl 170 g kovasavgélt tartalmazó oszlopon kloroform-metanol (85:15) keverékével kromatografálva tisztítjuk. A termék olvadáspontja 107—108° (bomlással, [a]^5 = = —15°± 1° (c = 2, etanol). Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol (85 :15), Rf = 0,60. 6.2 művelet Z-A sn-Ph e-Phe-(D-Trp )-Lys (Boc)- Th r(Bu t)Phe-D-Glu ( OBzlj-OBut 1,09 g Z-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)Phe-OH (1.7 művelet), 0,31 g HCl - [D-Glu(OBzl)]OBut (6.1 művelet), 0,13 g N-hidroxi-benzotriazol és 95 mg N-metil-morfolin 80 ml dimetilformamiddal készített oldatához 0-5°-on 0,21 g DCCI 2 ml dimetilformamiddal készített oldatát adjuk, és az elegyet 30 percig 0-5°-on és 15 órán át szobahőmérsékleten tartjuk. A kivált diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a szűrletet nagyvákuumban bepároljuk. A maradékot 30 ml vízzel eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk, és tisztítás céljából 10—10 ml metanollal még kétszer elkeveijük, és szüljük. Vékonyrétegkromatogram : kloroform-metanol (85:15), Rf = 0,85, kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf = 0,91. <5.3 művelet H-Asn-Phe-Phe-(D- Trp j-Lys(Bocj-Thr(But)Phe-[D-Glu)-OBut Az 1.9 műveletben leírtak szerint a H-Asn-Phe-Phe(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[D-Glu(OBzl)]-OBut (6.2 művelet) képletű vegyületet az előállítani kívánt termékké hidrogénezzük. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol (85:15), Rf = 0,13, kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf = 0,65. 6.4 művelet r r— í Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[D-Glu}-OBut Az 1.10 műveletben leírtakhoz hasonló módon a H-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[D-Glu]OBut képletű peptidet DCCI és N-hidroxi-benzotriazol hozzáadásával ciklizáljuk. A nyersterméket ellenáramú megoszlással (K = 0,52) tisztítjuk. Vékony ré tegkromatogram : kloroform-metanol! (85:15), Rf = 0,54, kloroform-metanol-víz (14 :6 :1), Rf = 0,83. 7. példa L Phe-Phe-(D-Trp)-Lys-Thr-Phe^ 235 mg I-----------------------------------------------------------1 — Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe — védett hexapeptidet az 1. példa szerint triíluorecetsawal megszabadítjuk a védőcsoportoktól, és acetáí formában az 1. példa szerinti rendszerben ellenáramú megoszlásnak alávetjük. A tiszta anyagot K = 5,4-nél izoláljuk. Vékonyrétegkromatogram (Merck kovasavgél): 45. rendszer: Rf = 0,3, 52. rendszer: Rf = 0,35, 157. rendszer: Rf = 0,5. A kiindulási anyagot a következőképpen állítjuk elő: 7.1 művelet Z-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But )-Phe-OTmse 2,84 g H-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-OTmse (1.5 művelet és 1,52 g Z-Phe-Phe-OH 12 ml dimetilformamiddal készített oldatához 0°-on 0,62 g N-hidroxi-benzotriazolt és 0,98 g DCCI-et adunk, és a reakciókeveréket 16 órán át 0°-on állni hagyjuk. Ezután a diciklohexilkarbamidot kiszűijük, és a csapadékot hígított nátriumhidrogénkarbonát-oldat becsepegtetésével kicsapjuk. A temréket vizes metanolból átkristályosítjuk. Vékonyrétegkromatogram (Merck kovasavgél): 157A rendszer: Rf = 0,6. 7.2 művelet Z-Phe-Phe-(D- Trp)-Lys(Boc)-Thr( Butj-Phe-OH 2,86 g Z-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe- OTmse 13,5 ml dimetilformamiddal készített oldatához 30°-on 6,1 ml 1,12 mólos dimetilszulfoxidos tetrabutil-13 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
