184368. lajstromszámú szabadalom • Eeljárás D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szuklfát előállítására
184 368 2 klórszénsav-izobutilészert, majd 5 perc után a fenti dimetilformamidos oldatot. A reakcióelegyet tovább keverjük 1 órán át —15 °C-on és 1 órán át 0 °C-on. Ezt követően 30 ml benzollal hígítjuk, a kivált sókat kiszűrjük és kétszer 10 ml benzollal mosuk. A benzolos-dimetilformamidos olda- g tot 50 ml vízzel hígítjuk és a fázisokat elválasztjuk. A vizes fázist kétszer 10 ml benzollal kirázzuk, majd az egyesített benzolos oldatokat rendre háromszor 30 ml 10%-os nátrium-karbonát-oldattal, 30 ml vízzel, háromszor 30 ml 0,5 n kénsavval és kétszer 30 ml vízzel mossuk, majd víz- ^ q mentes nátrium-szulfáton történő szárítás után csökkentett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot petroléterrel eldörzsöljük, szűrjök, petroléterrel mossuk és levegőn szárítjuk. 9,65 g (76%) cím szerinti terméket kapunk. Rf = 0,81—0,89. 15 2. lépés: terc-butiloxi-karbonil-D-fenilalanil-L-prolil- Nc-benziloxi-karbonil-L-arginin-aldehid 9,52 g (15 mmól) védett tripaptid-laktámot (1. példa, 1. lépés) feloldunk 45 ml tetrahidrofuránban, és —20 °C-on erős keverés mellett hozzáadunk 11,25 mmól lítium- 20 alumínium-hidridet tartalmazó tetrahidrofurános LiAlH4-oldatot (0,4 mólos oldatból mintegy 28 ml). A redukció eredményességét rétegkromatográfiával ellenőrizzük (a laktám Rj értéke 0,71—0,77 és az aldehid Rf értéke 0,31—0,39), és szükség szerint további hidrid-oldatot ada- 25 gólunk. A reakció végén a tetrahidrofurános oldatot 0,5 n kénsavval óvatosan 3-as pH-ra savanyítjuk, majd vízzel hígítjuk úgy, hogy az anyag ne váljon ki (kb. 100 ml). Ezután kétszer 30 ml n-hexánnal kirázzuk. A vizes tetrahidrofurános oldatot háromszor 75 ml metilén-kloriddal kirázzuk, 30 majd az egyesített metilén-kloridos oldatokat háromszor 10 ml 10 % -os nátrium-karbonát-oldattal, és kétszer 10 ml vízzel mossuk. Ezt követően a metilén-kloridos oldatot vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, és csökkentett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot 50 ml benzolban fel- 35 oldjuk és az oldatot csökkentett nyomáson ismét bepároljuk. A benzolos oldást és bepárlást még egyszer megismételjük. Az így kapott párlási maradékot dietiléterrel eldörzsöljük, szűrjük, dietiléterrel mossuk és levegőn szárítjuk. 6,9 g (72%) cím szerinti terméket kapunk. Rf = 0,3—0,4. 40 3. lépés: terc-butiloxi-karbonil-D-fenilalanil-L-prolil- L-arginin-aldehid-hemiszulfát 6,4 g (10 mmól) védett tripeptid-aldehidet (1. példa, 2. lépés) feloldunk 50 ml víz, 50 ml tetrahidrofurán és 10 ml 1 n kénsav elegyében, majd 1 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció előrehaladását rétegkromatográfiával követjük (a guanidinocsoportján védett tripeptid-aldehid Rf értéke 0,95—1,0 és a szabad tripeptid-aldehid Rf értéke 0,45—0,54). A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, 30 ml 50%-os vizes tetrahidrofuránnal mossuk, majd a szűrletet csökkentett nyomáson mintegy 60 ml-re töményítjük. A maradékot négyszer 40 ml n-butanollal kirázzuk. Amennyiben a vizes fázis tartalmaz cím szerinti terméket (Rf = 0,45—0,54), 5 ml ^ tetrahidrofuránt adunk hozzá, és két-három 40 ml nbutanollal kirázzuk. A n-butanolos fázisokat egyesítjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A párlási maradékot 1:1 dietiléter-diizopropiléter eleggyel eldörzsöljük, szűrjük és a fenti eleggyel mossuk, majd vákuum exszikká- gg torban szántjuk. 4,4 g (80%) cím szerinti terméket kapunk. Rf = 0,45-0,54. [cx]q0 = —65 ±1° (c = 1, vízben). Elemzési eredmény a C25H3805N6 • 0,5 H2S04 (551,64) képletre vonatkoztatva: számított: C% = 54,43; H% = 7,13; N% = 15,23 S04% = 8,71; talált: C% = 54,5 ; H% = 7,3 ; N% = 15,2 ; S04 = 8,7 . 4. lépés: D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfát 2,74 g (5 mmól) terc-butiloxi-karbonil-D-fenilalanil-L- prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfátot (1. példa, 3. lépés) feloldunk 5 ml vízben, keverés közben hozzáadunk 5 ml 10 n kénsavat, és 50 °C-ra melegítjük. Az oldatot 15 percig 50 °C-on keverjük, majd 25 ml jeges vízzel hígítjuk, és jeges vízhűtés mellett 6,5-ös pH-ra állítjuk szilárd kalciumkarbonáttal (kb. 2,25 g szükséges). A kivált kalciumszulfátot kiszűrjük, és kétszer 5 ml vízzel mossuk. A szűrletet kétszer 10 ml n-butanollal kirázzuk, majd csökkentett nyomáson mintegy 30 ml-re töményítjük, kívánt esetben szűrjök és liofilizáljuk. 2,25 g (79%) cím szerinti terméket kapunk, amely 4,8% kalcium-szulfátot tartalmaz. Rf = 0,35-0,40. [ct]$ = -117 ±1° (C = 1, vízben). Elemzési eredmény a C20H30O3N6 . H2S04 • 3H20.0,2 CaS04 (565,85) képletre vonatkoztatva: számított: C% = 42,45; H% = 6,77; N% = 14,85; S04% = 20,37; Ca% = 1,41; H20% = 9,55; talált: C% = 42,2 ; H% = 6,9 ; N% = 14,85; S04% = 19,8 ; Ca% = 1,3; H20% = 9,75. 2. példa D-Fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfát előállítása 1. lépés: terc-butiloxi-karbonil-D-fenilalanil-L-prolil- NG-karboxi-L-arginin-aldehid 6,4 g (10 mmól) védett tripeptid-aldehidet (1. példa, 2. lépés) feloldunk 100 ml 75 % -os vizes etanolban és 1 g 10 % -os csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció előrehaladását rétegkromatográfiával követjük (a védett tripeptid-aldehid és az NG-karboxi-származék Rf értéke 0,90—0,95, illetve 0,45—0,55). A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, 30 ml vízzel mossuk, majd a szűrletet csökkentett nyomáson 30—40 ml-re töményítjük. A maradékot 100 ml vízzel hígítjuk, kétszer 20 ml metilénkloriddal kirázzuk és liofilizáljuk. 5,1 g (85 %) cím szerinti terméket kapunk. Rf = 0,45-0,55. Aminosav analízis: Phe = 0,96: Pro = (vonatkoztatási alap). Mólsúly az aminosav analízis alapján = 570. 2. lépés: D-fenilalanil-L-prolit-L-aiginin-aldehid-szulfát 2,85 g(5 mmól) terc-butiloxi-karbonil-D-fenilalanil-L- prolil-NG-karboxi-L-arginin-aldehidet(2. példa, 1. lépés) feloldunk 5 ml vízben, keverés közben hozzáadunk 5 ml 10 n kénsavat és 50 °C-ra melegítjük. Az oldatot 15 percig 50 °C-on keverjük, majd 25 ml jeges vízzel hígítjuk és jeges 5
