184256. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorellenes hatású antibiotikum komplexek előállítására

1

184 256

2

és a maradékot kloroform-metanol elegyből kristályosítjuk. Hasonlóan a C komponens nyers preparátumát a 21-35. csövekből kapjuk a fent leírt ellenáramú megoszlási módszerrel. A C komponens tisztítását szilikagél kromatográfiával és kloroform-metanolból való kristályosítással végezzük. Az A, B, C, D, E és F komponensekre a kitermelés a megfelelő sorrendben: 988 mg, 420 mg, 848 mg, 130 mg, 119 mg és 114 mg.

4. példa

A 3. példában kapott BBM-928 A komponens vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálata 10% metanolt tartalmazó toluolos rendszert használva azt mutatja, hogy a minta nem teljesen homogén, mert egy további, közvetlenül a BBM-928 A komponens felett futó anyagot tartalmaz. A következő lépésekben tisztítjuk meg az anyagot:

1. A mintát szilikagél oszlopon kromatografáljuk, a tiszta kloroformtól a 8% metanolt tartalmazó kloroformos elegyig terjedő lineáris gradienst használunk. A 2,4 és 3,3% metanol kloroform elegynél eluálódó frakciókat egyesítjük a következő lépéshez.

2. Homorú gradienst készítünk, három cső használatával, az első kettő 2% metanol toluolos oldatát, a harmadik 6% metanol toluolos oldatát tartalmazza. Az 1. lépésben kapott anyagot szilikagél oszlopon a fenti gradienssel kromatografálva kapunk egy mellékkomponenst, mely szorosan a megtisztított BBM-928 A komponens (ezentúl BBM-928P) előtt eluálódik.

A BBM-928 Ap molekulasúlya mező deszorpciós tömegspektrometriával meghatározva 1427,aCí4H7gN14O24 tapasztalati képletnek megfelelően (molekulasúly 1427, 417). Elemanalízis C64H7gN14024-re (a minták 100°C- on szárítva 18 órán át).

Számított: C: 53,85; H: 5,51; N: 13,74; Oa: 26,9%; Mértb: C: 52,47; H: 5,48; N: 13,81; Oa: 28,24%;

a: különbség alapján, b: három meghatározás átlaga.

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás BBM-928 rákellenes hatású antibiotikum komplex, valamint BBM-928A, B, C, D, E és F jelű komponenseinek előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely Aktinomyces-törzset (ATCC 31 491), illetve ezen törzs tulajdonságaival rendelkező mutánsát süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között, felhasználható szénforrást és nitrogénforrást, valamint adott esetben szervetlen sókat tartalmazó vizes táptalajban tenyésztünk, és a BBM-928 komplexet, és adott esetben az A, B, C, D, E vagy F jelű komponensek bármelyikét a táptalajból elkülönítjük.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a (XI) képlet szerinti szerkezettel rendelkező, ahol Ser szerint, a Gly glicint, a Sár szarkozint, HM-Val /3-hidroxi- N-metü-valint, Rj és R2 acetilcsoportot jelent, BBM-928A jelű vegyület előállítására, mely az alábbi tulajdonságokkal rendelkezik:

a) oldódik kloroformban és diklór-metánban, gyengén oldódik benzolban, etanolban, metanolban és n-butanolban, és lényegében oldhatatlan vízben és n-hexánban;

b) pozitív reakciót ad vas(III)-kloriddal és az Ehrlichreagenssel, nem ad reakciót a Tollens-, Sakaguchi-reagensekkel és ninhidrinnel;

c) hatásos rákellenes anyag egérbe intraperitoneálisan beültetett P388 leukémia, L1210 leukémia, B16 melanóma, Lewis Lung karcinóma és szarkóma 180 aszkites daganatok ellen;

d) olvadáspontja: 246-248;

e) fajlagos forgatási értéke: [a]:D5 = 27° (1%, kloroform);

f) molekulasúlya: 1427;

g) közelítő elem-összetétele: 52,47% szén, 5,48% hidrogén, 13,81% nitrogén és 28,24% oxigén;

h) a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatok során az n-butanol, metanol, viz 63:27:10 arányú elegy ében Rf =* 0,71, a xilol, metil-etil-keton, metanol 5:5:1 arányú elegyében Rf = 0,48 értékkel fut;

i) savas hidrolíziskor vízoldható, ninhidrin-pozitív anyagok keletkeznek belőle, a (3-hidroxi-N-metil-valin, glicin, szerin és szarkozin;

j) lúgos hidrolízis során a (VI) általános képletű vegyület keletkezik belőle, ahol a Ser szerint, a Gly glicint, a Sár szarkozint, a NM-Val /3-hidroxi-N-metil-valint, az X pedig egy aminosavat jelent;

k) az 1. ábrán bemutatott kálium-bromidban felvett infravörös spektrummal rendelkezik;

l) deuterált kloroformban oldva az 5. ábrán bemutatott mágneses magrezonancia spektrummal rendelkezik,

azzal jellemezve, hogy a kapott komplexből a BBM-928 A vegyületet elkülönítjük.

3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a (XIV) képlet szerinti szerkezettel rendelkező, ahol a Ser szerint, a Gly glicint, a Sár szarkozint, a HM-Val /3-hidroxi-N-metil-valint, Rt pedig acetilcsoportot jelent, BBM-928B jelű vegyület előállítására, mely az alábbi tulajdonságokkal rendelkezik:

a) oldódik kloroformban és diklór-metánban, gyengén oldódik benzolban, etanolban, metanolban és n-butanolban, lényegében oldhatatlan vízben és n-hexánban;

b) pozitív reakciót ad vas(III)-kloriddal és az Ehrlich-reagenssel, nem reagál a Tollens- és Sakaguchi-reagensekkel és ninhidrinnel;

c) hatásos rákellenes anyag egerekbe intraperitoneálisan beültetett P388 leukémia ellen;

d) olvadáspontja: 214-217 °C;

e) fajlagos forgatóképessége: [a]I5=* —74° (1%, kloroform);

f) közelítő elem-összetétel: 50,14% szén, 5,29% hidrogén, 12,34% nitrogén és 32,23% oxigén;

g) a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatok során az n-butanol, metanol, víz 6327:10 arányú elegyében Rf = 0,53, a xilol, metíl-etil-keton-metanol 5:5:1 arányú elegyében Rf — 0,26 értékkel fut;

h) a 2. ábrán bemutatott, kálium-bromidban felvett infravörös spektrummal rendelkezik;

i) deuterált kloroformban oldva a 6. ábrán bemutatott mágneses magrezonancia spektrummal rendelkezik,

azzal jellemezve, hogy a kapott komplexből a BBM-928 B vegyületet elkülönítjük.

4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a (XV) képlet szerinti szerkezettel rendelkező, ahol a Ser szerint, a Sár szarkozint és a HM-Val /3-hidroxi-N-metil-valint jelent, BBM-928 C jelű vegyület előállítására melynek tulajdonságai:

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

7