184229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunszabályozó hatású polimervegyületek előállítására
1 184 229 2 kezeljük intraperitoneális injekcióval. Két csoportot kezelünk, a csoportokba négy állatot osztunk. A túlélést és a tumor újramegjelenését 7 hét múlva vizsgáljuk. A testsúlykilogrammra számítva 30 mg polimeri kapott állatok a 47. napon élnek, és a tumor megjelenése egyáltalán nem figyelhető meg. A műtétkor testsúlykilogrammra számítva 65 mg hatóanyagot kapott állatok közül az egyik a 16. napon, a tumor újramegjelenése után elpusztult, ugyanakkor a másik három a 47. napon él, és a tumor újramegjelenése nem tapasztalható rajtuk. 16. példa A 15. példában megadottakat ismételjük meg a Fischer patkányokkal a rosszindulatú daganat újramegjelenésének gátlására, azzal a különbséggel, hogy különböző imid-tartalmú polimereket használunk. A három polimerben az imid-tartalom nulla, öt és 21,7 %. A tumor beültetését a 13., 14. és 15. példában megadottak szerint végezzük. A tumor műtéti eltávolítását a beültetést követő 14. napon végezzük. Kontrollként négy állatot használunk, ezek a rosszindulatú daganat eltávolításakor nem kapnak hatóanyagot. A tumor újramegjelenése a 21., 33., 40. és 44. napon (a műtétet követően), átlagosan a 34. napon 100%-os. Ebben a kontrollcsoportban két állat a 44. napon pusztult el, a másik kettő él, és ezeket leöljük. Mindkettőben metastázisos állapotot figyeltünk meg. 5 állatot tartalmazó csoportnak intraperitoneálisan, testsúlykilogrammra számítva 30 mg, a 2a. példa szerinti polimert (imid-tartalom nulla) adagolunk a tumor műtéti eltávolítása idején. Ebben a csoportban két patkány esetén a műtétet követő 33. napon megfigyeltük a tumor újramegjelenését, a harmadikban a 40. napon. Az 55. nap után az öt patkány közül háromban (60%) megjelent a tumor. Hat állatnak intraperitoneálisan, testsúlykiiogrammra számolva 30 mg, a harmadik példa 4. táblázatának 1. vegyületét adagoljuk, ez a vegyület 5% imidcsoportot tartalmaz. Az 55. napon ezek közül az állatok közül kettő elpusztult, azonban tumor nem volt bennük, és metastázist sem figyeltünk meg. A negyedik csoportba tartozó hat patkánynak intraperitoneálisan, testsúlykilogrammra számítva 30 mg 7. példa 6. táblázat szerinti A polimert adunk, ez a polimer 21,7 % imidet tartalmaz. A csoportba tartozó állatok közül egyben a 21. napon megjelent a tumor, a másikban a 43. napon. 55 nap múltán az összes állat él. A hat állatból kettőben jelent meg a tumor, és ez 33%-os átlag. 17. példa A 13-16. példákban ismertetett állatkísérletek során a polimert injekcióval adagoltuk a peritoneális üregbe. A jelen példában olyan kísérletet ismertetünk, amelynek során imid-tartalmú készítményt adagolunk, orálisan, a tumor műtéti eltávolításával egyidejűleg, a rosszindulatú daganat gátlására, vagy megjelenésének megakadályozására. A 16. példában ismertettük, hogy a kontroll állatok, amelyek a rosszindulatú daganat eltávolitásakor nem kapnak hatóanyagot, átlagosan a 34. napon tumort hordoznak. Ebben a példában tíz Fischer patkányban a 13. példában megadottak szerint tumorfertőzést okozunk. A ki- 18 fejlődött rosszindulatú daganatokat műtéti úton a beültetést követő 13. napon eltávolítjuk, és ugyanakkor testsúlykilogrammra számítva 30 mg 7. példa 6. táblázat A szerinti polimert (21,7% imid-tartalom) adagolunk 1 ml steril vízben, orálisan. 10 héten át vizsgáljuk a tumor megjelenését. Egy patkány a tumor műtéti eltávolítása közben elpusztult. A megmaradó kilenc patkány közül hétben a tumor műtéti eltávolítását követő 42., 42., 42., 43., 46., 50., illetve 59. napon kisméretű tumorfejlődés tapasztalható. Két patkányban a 70. napon sem jelent meg rosszindulatú elváltozás. 18. példa A példa során vizsgáljuk, hogy a 7. példa VI-A szerinti polimerrel kezelt tumorsejtek antigén tulajdonságai változnak-e, vagy közvetlen citotoxikus hatásuk kimutatható-e a tumorsejtekkel szemben. A 13. példában megadott BLCa tumorból tumorsejteket készítünk oly módon, hogy kivágunk egy szubkután tumormasszát. A sejtekből szuszpenziót készítünk oly módon, hogy felszabadítjuk a daganatból a sejteket, és ezután a daganatból származó darabkákat enyhe tripszines kezelésnek vetjük alá. Az elkülönített sejteket háromszor pufferolt sóoldattal (BSS) mossuk, és az élő/nem élő sejtek arányának megállapítására vizsgáljuk a szuszpenziót. A tisztítás ezen fázisában 90—95 %-os sejtpopulációt kapunk. Earl BSS oldattal készült Eagls minimal táptalajhoz 10% marhaszérumot adunk, majd milliliterenként 1X105 sejtet tartalmazó tumorsejt szuszpenziót készítünk. A szuszpenziót a 7. példa VI-A szerinti polimerrel inkubáljuk, a polimer koncentrációja 30 mg/1. Az inkubációt 37 °C hőmérsékleten 90 percen át végezzük, az inkubációt követően 300 g mellett 6 percen át centrifugálunk. A sejteket élőképesség szempontjából vizsgáljuk, az élőképesség az előinkubációs értékhez képest nem változik. A fenti eljárást három alkalommal megismételjük. A fenti kísérletből származó sejteket hím Fischer patkányoknak adjuk szubkután 1X106 sejtkoncentrációban. Öt állatnak polimerrel kezelt sejteket adunk, további öt állatnak olyan daganatsejteket, amelyeket a fenti módon, de polimer nélkül kezeltünk. Az eredményeket a 12. táblázatban adjuk meg. 12. táblázat Patkány száma Kontrollok1 2—3 cm méretű tumor kifejlődésének napja Kezelt állatok2 2—3 cm méretű tumor kifejlődésének napja 1 11 11 2 11 11 3 13 13 4 11 11 5 13 11 1 1X106.A tumorsejteket polimer nélkül inkubáltuk, szubkután adagoltuk. 2 1X106. A tumorsejteket a 7. példa VI-A szerinti polimerrel inkubáltuk és szubkután adagoltuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
