183636. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új anorexigén hatású peptidek előállítására
1 183 636 2 1-butanol : ecetsav : víz 4 : 1 : 5 térfogatarányú elegyének felső fázisa = 0,04; etil-acetát : piridin : ecetsav :víz 5 : 5 :1 :3 térfogatarányú elegye = 0,15; 1- butanol : ecetsav ; víz : etil-acetát 1 : 1 :1 : 1 térfogatarányú elegye = 0,10; 2- propanol : 1 mólos ecetsav-oldat 2 : 1 térfogatarányú elegye = 0,04. Aminosav-elemzésnél a következő értékeket kapjuk: Glu = 1,05, Gly = 1,00 és 3 -MefBs = 0,96. 10. példa L-Piroglutamil-L-hisztidil(tozil)-D-alanil-0-CH2-gyanta Az 1. példában ismertetett módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy Boc-Gly-0-CH2-gyanta helyett kereskedelmi forgalomban kapható klórmetilezett gyantából [1%-ig térhálósított, a Bio Rád Labs richmondi (Kalifornia, Amerikai Egyesült Államok) cég] előállított Boc-D-Ala-0-CH2-gyantát {2,78 g, í millimól D-alaninnak felel meg), D-piroglutaminsav helyett 3,0 millimól L-piroglutaminsavat, továbbá 3,0 millimól tercbutoxi-karbonil-tozil-hisztidint használunk. így a cím szerinti vegyületből 3,37 g-ot kapunk. 11. példa L- Piroglutamil - L-hisztidü - D- alanin A 2. példában ismertetett módon járunk el, de á 10. példa szerint előállított, 3,37 g mennyiségű terméket használjuk kiindulási anyagként, továbbá az eluátum 260. és 320. ml-e közötti frakciót különítjük el. Ezt a frakciót ezután még tovább tisztítjuk úgy, hogy felviszszük 1,5X 145 cm méretű, sziiikagélből készült oszlopra, majd 1-butanol, ecetsav, víz és etil-acetát 1 : 1 : 1 : 1 térfogatarányú elegyével eluálást végzünk. Az eluátum 380. és 560. ml-e közötti frakciókat elkülönítjük, majd liofüizáljuk, 390 mg mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapva színtelen por formájában. Sziiikagélből készült lemezeken négy különböző oldószerrel végrehajtott vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatokban a termék peptid homogénnek bizonyul. A vizsgálat során 20-30 jug-os mintákat viszünk fel folt alakjában. Az előhívás klórgázas kezelés, majd keményítőreagenssel végzett bepermetezés útján történik. A következő Rrértékeket kapjuk. 1-butanol : ecetsav : víz 4 : 1 : 5 térfogatarányú elegy ének felső fázisa = 0,10; etil-acetát : piridin : ecetsav : víz 5 : 5 : 1 : 3 térfogatarányú elegye = 0,30; 1- butanol : ecetsav :víz : etil-acetát 1 :1 : 1 : 1 térfogatarányú elegye = 0,21; 2- propanol : 1 mólos ecetsav-oldat 2 : 1 térfogatarányú elegye = 0,25. Aminosav-elemzésnél a következő értékeket kapjuk: Glu = 1,04, Alá = 1,00 és His = 0,95. 12 * * * * * * 12. példa D - Piroglutamil - L- 3 - metil -hisztidil - D - alanil - O - CH2 -gyanta Az 1. példában ismertetett módon járunk el, de a 10. példában ismertetett módon előállított Boc-D-Ala-O-CH2-gyantából 1,39 g-ot (0,5 millimól D-alaninnak felel meg), továbbá 1,5 millimól terc-butoxi-karbonil-3’-metil-hisztidint és 1,5 millimól D-piroglutaminsavat használunk. így a cím szerinti termékből 1,64 g-ot kapunk. • 13. példa D-Piroglutamil - L-3-metil-hisztidil-D-alanin A 2. példában ismertetett módon a 12. példa szerinti termék 1,64 g-ját 20 ml hidrogén-fluorid és 5 ml anizol eiegyével kezeljük, 300 mg mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapva színtelen pelyhes por formájában. A termék a 2. példában ismertetett módon végrehajtott vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatokban homogénnek bizonyul a következő Rf-értékekkel: 1-butanol : ecetsav : víz 4 : 1 : 5 térfogatarányú elegyének felső fázisa = 0,05 ; etil-acetát : piridin : ecetsav : víz 5 :5 :1 : 3 térfogatarányú elegye = 0,15; 1- butanol : ecetsav : víz : etil-acetát 1 :1 :1 :1 térfogatarányú elegye =0,10; 2- propanol ; 1 mólos ecetsav-oldat 2 : 1 térfogatarányú elegye = 0,05. Aminosav-elemzésnél a következő értékeket kapjuk: Glu = 1,07, Alá = 1,00 és 3 -MeHis = 1,01. 14. példa L-Pírogjutamil -L-hisztidil(tozil)- O - CH2 - gyanta Az 1. példában ismertetett módon járunk el, de Boc-Gly-0-CH2-gyanta helyett kereskedelmi forgalomban kapható klórmetilezett gyantából (a 10. példában megadott minőségű) előállított Boc-His(Nim-Tos)-0-CH2- -gyanta 3,00 grammjából (1,0 millimól hisztidinnek felel meg) indulunk ki, ezt az a) — h) mosási műveleteknek vetjük alá, majd az így kezelt gyantához 3,0 millimól L-piroglutaminsavat kapcsolunk 3,0 millimól diizopropil-karbodiinúd segítségével. A dipeptid-gyantát ezután metilén-kloriddal háromszor és metanollal háromszor mossuk, majd szárítjuk, 3,1 g mennyiségben a cím szerinti terméket kapva. 15. példa L- Piroglutamil - L-hisztidil - etil amid A 14. példában ismertetett módon kapott 3,1 g terméket 0-°C-on 20 ml dimetil-formamidban szuszpendáljuk, majd a szuszpenzióhoz 3 ml etil-amint adunk. Az így kapott reakcióelegyet 0 °C-on 18 órán át keverjük, majd az oldószert és a fölös etil-amint csökkentett nyomáson eltávolítjuk. A maradékot 2 mólos ecetsav-oldattal extraháijuk, majd szűrjük a gyanta eltávolítása céljából. A peptid-tartalmú szürletet gélszűréssel tisztítjuk Sephadex G-15 jelzésű gyantából (finomszemcsés, kémiailag módosított térhálósított dextrán) álló 2,5X95 cm méretű oszlopon. A terméket tartalmazó frakciókat liofilizálva 100 mg mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk színtelen pelyhes porként. A termék a 2. példában ismertetett módon végrehajtott vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok alapján homogén, az ott említett négyféle oldószerrendszerrel a kapott Rf-értékek a következők: 1-butanol : ecetsav : víz 4-; 1 : 5 térfogatarányú elegyének első fázisa = 0,18; etil-acetát : piridin : ecetsav : víz 5:5:1 :3 térfogatarányú elegyének első fázisa = 0,56; 1- butanol ; ecetsav : víz : etil-acetát 1 : 1 : 1 : 1 arányú elegye = 0,55; 2- propanol és 1 mólos ecetsav-oldat 2 : 1 arányú elegye = 0,29. Aminosav-elemzésnél a következő értékeket kapjuk: Glu = 1,05, His = 1,00 és EtNH2 = 1,03. 5‘ 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
