183636. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új anorexigén hatású peptidek előállítására
1 183 636 2 ziloxi-karbonilcsoport (Z). A hordozógyantával való kapcsolódáshoz különösen célszerűen alkalmazható Y rögzítőcsoport a már korábban említett —O—CH2- csoport. Az említett védőcsoportok stabilak azokkal a reagensekkel és reakciókörülményekkel szemben, amelyek a terminális aminocsoport védőcsoportjának eltávolítására és az ezután következő kapcsolási reakció végrehajtására felhasználásra kerülnek. A korábban említett, 1—3 szénatomot tartalmazó alkilcsoport alkillánca egyenes vagy elágazó szénláncú lehet. Miként utaltunk rá, az (I) általános képletű vegyületek a véghelyzetű karboxilcsoporttal kezdve lépésekben végrehajtott szilárd fázisú szintézissel állíthatók elő. Ez a szintézis röviden a következőképpen foglalható össze: Először az a-aminocsoporthoz kapcsolódó védőcsoport eltávolítására szolgáló kezelésnek vetünk alá egy, B vagy C jelentésének — ha C jelentése -NHR1 általános képletű csoport, illetve R1 1—3 szénatomot tartalmazó áltól csoportot jelent — megfelelően megválasztott aminosavat (amely a-aminocsoportján egy alkalmas védőcsoportot és adott esetben más védőcsoportokat hordoz, továbbá a korábbiakban definiált Y rögzítőcsoport segítségével gyantahordozóhoz van kapcsolva), majd ezután B vagy A jelentésének megfelelően megválasztott aminosawal kapcsoljuk, kondenzálószerként egy alkalmas dialkilvagy dicikloalkil-karbodiimidet használva. Ezt az eljárást mindaddig ismételjük, míg a kívánt számú aminosav kapcsolódik egymáshoz. Ezt követően eltávolítjuk a terminális aminocsoport védőcsoportját, valamint az adott esetben jelenlevő egyéb védőcsoportokat és az Y rögzítőcsoportot. Az oldószer eltávolítása után az előállítani kívánt nyers pepiidet kapjuk. A nyers terméket kromatográfiásan, például gélszűréssel tisztítjuk, az előállítani kívánt pepiidet tiszta állapotban kapva. Az (I) általános képletű vegyületek előállításában hasznosított kiindulási anyagok kereskedelmi forgalomban levő vegyületek vagy pedig ismert módon egyszerűen előállíthatok. Az (I) általános képletű vegyületek előállításában felhasznált aminosavak mindegyike kereskedelmi forgalomból beszerezhető, kivéve a homo-piroglutaminsavat (amelynek előállítását Greenstein és Winitz a „Chemistry of the Amino Acids” c. könyv 2407— 2462. oldalain írják le; a könyv a J. Wiley kiadó gondozásában 1961-ben New Yorkban jelent meg) és a ß-(2- -tienil)-alanint (amelynek előállítása a most említett köny 2707. oldalán található meg). A célszerűen alkalmazható szilárd hordozógyanták közé tartoznak a klór-metilezett vagy hidroxi-metilezett gyanták- Ezek közül az először említettek az előnyösebbek. A hidroxi-metil-gyanták előállítását Bodansky, M. ésSheenan, J.T. a Giern. Ind. (London), 38,1597(1966) szakirodalmi helyen ismertetik. Klór-metüezett gyantát a Bio Rád Laboratories (Richmond, Kalifornia állam) amerikai cég hoz forgalomba. Klór-metilezett aminogyanta alkalmazása esetén észter - rögzítőcsoportot képezünk az a-aminocsoportján védett és adott esetben egyéb védőcsoportot hordozó C aminosawal (vagy B aminosawal, ha C a korábban meghatározott -NHR1 csoportot jelenti). A rögzített és védett pepiid C-terminális alkil-amiddá való átalakítására előnyös eljárás a védett pepiid lehasítása a gyantáról egy alkil-aminnal (melynek alkilrésze 1-3 szénatomot tartalmaz) végzett kezelés útján [lásd Coy, D.H. és munkatársai cikkét a Biochem. Biophys. Res. Commun., 57. 335 (1974) szakirodalmi helyen], mely kezelés eredményeképpen tehát a megfelelő védett peptid-alkilamid képződik. Ezután az utóbbi vegyület védőcsoportjait nátriummal és cseppfolyós ammóniával végzett kezelés vagy előnyösen hidrogén-kloriddal végzett hasítás útján eltávolítjuk, a megfelelő előállítani kívánt peptidet kapva. Egy további eljárási lehetőség a hasításnak egy rövidszénláncú alkanollal, előnyösen metanollal vagy etanollal trietil-amin jelenlétében végrehajtott átészterezéssel történő kivitelezése, amikor a megfelelő észtert kapjuk. Ez az észter azután egy megfelelő alkil-amiddá alakítható át. Végül azután a korábbiakban ismertetett módon el távolíthatók a védőcsoportok. Amennyiben a szabad karbonsav előállítása kívánatos, akkor a hasítást előnyösen anizolbanhidrogénfluoriddal hajtjuk végre. Ha savamidot kívánunk előállítani, akkor a hasítást ammóniával hajtjuk végre. Ilyen vonatkozásban utalhatunk többek között a Stewart, J.M. és Young, J.D. „Solid Phase Peptide Synthesis” c. könyvének 40-49. oldalain írottakra (a könyv 1969-ben a W.H. Freeman and Co. San Francisco-i kiadó gondozásában jelent meg). A találmány szerinti eljárás egy előnyös foganatosítási módja értelmében tehát a-aminocsoportján védett glicint, előnyösen te re - bu tox i - karb onil - glicin t egy katalizátor, előnyösen cézium-hidrogén-karbonát vagy trietü-amin segítésével klór-metilezett gyantához kapcsolunk. A kapcsolást követően az a-aminocsoport védőcsoportjá.t eltávolítjuk, e célból például trifluor-ecetsavat metilén-kloridban, trifluor-ecetsavat magában vagy sósavat dioxánban használva. A védőcsoport eltávolítását 0 °C és szobahőmérséklet közötti hőmérsékleteken hajtjuk végre. Valamilyen speciális a-amíno-védőcsoport eltávolítására alkalmazhatunk más reagenseket, illetve reakciókörülményeket (lásd Schroder, E. és Lubke, K. „The Peptides” c. könyvének 72—75. oldalain; a könyv az Academic Press New yorki kiadó gondozásában 1965-ben jelent meg). Az a-amino-védőcsoport eltávolítását követően a többi, az a-aminocsoporton védett aminosavat egymás után a kívánt sorrendben egymáshoz kapcsoljuk, az előállítani kívánt peptidet kapva. A védett aminosavakat minden egyes esetben háromszoros fölöslegben adagoljuk a szilárd fázisú szintézis végrehajtására szolgáló reaktorba. A kapcsolási reakciókat metilén-kloridban vagy dimetfl-formamid és metilén-klorid elegy eiben hajtjuk végre. Azokban az esetekben, amikor a kapcsolás nem teljes mértékben megy végbe, a kapcsolási műveletet megismételjük az a-amino-védőcsoport eltávolítását és a következő aminosavaknak a szilárd fázishoz való kapcsolását megelőzően. Az egyes szintézislépésekben a kapcsolási reakció sikeres végbemenetelét a Kaiser, B. és munkatársai által az Analyt. Biochem., 34. 595 (1970) szakirodalmi helyen ismertetett módon, ninhidrin-reakció segítségével állapítjuk meg. A kívánt aminosav-szekvencia sikeres szintézisét követően a védett peptidet a gyantahordozóról a korábban említett módon, az alkilrészben 1—3 szénatomot tartalmazó alkfl-airanok valamelyikével végzett kezelés útján, a megfelelő peptid-alkü-amid képződése közben eltávolítjuk. A hisztidfl-rész védőcsoportjaként dinitro-fenil- vagy tozílcsoport alkalmazása esetén ezek a védőcsoportok az alkil-aminnal végzett kezelés során lehasadnak. A peptidet a gyantahordozóról eltávolíthatjuk egy rövidszénláncú alkanollal, például metanollal vagy etanollal trietil-amin jelenlétében végrehajtott átészterezés útján is, az így kapott ész5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
