183433. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyűszűvirág (Digitális Lanata EHRH.) szaporítóanyag előállítására szövettenyészetben
183 433 CaCV2HjO KH2P04 MgS04*7H20 MnS04-H20 H3BO3 ZnS04-4H20 Na2Mo04*2H20 CuS04*5H20 Fe(ll) EDTA komplex biotin glicin inozit nikotinsav piridoxin tiamin fólsav szaharóz agar-agar 166.0 mg/1 68.0 mg/1 185.0 mg/1 25.0 mg/1 10.0 mg/1 10.0 mg/1 0,25 mg/1 0,025 mg/1 oldat*5,00 ml/1 0,05 mg/1 2.0 mg/1 100.0 5.0 0,5 0,5 5.0 2000,0 1000,0 mg/1 mg/1 mg/1 mg/1 mg/1 mg/1 mg/1 A fenti tápanyagokat tartalmazó táptalaj pH-értékét a sterilezést megelőzően 1 n NaOH oldattal 5,6-ra állítjuk be. * = A Fe(II) EDTA (vas-etiléndiamin-tetraecetsav) komplex oldatot a következő módon készítjük: 557 mg FeSÖ4* 7H20-tés 756 mg Na2EDTA-t öszszemérünk, majd desztillált vízzel 100 ml-re egészítjük ki. Az így nyert oldat 5 ml-e 27,8 mg FeS03 *7H2O-nak, azaz 5,6 mg FE(II)-nek felel meg. A táptalaj 20-20 ml-t kémcsövekbe adagolunk, majd 121 °C-on 20 percig autoklávban sterilezzük. A magvakat egyenként steril körülmények között a táptalaj felületére helyezzük és kb. 3 hétig (2-3 lombleveles stádium eléréséig) klimatizált viszonyok között tartjuk. (26 ± 1°C hőmérséklet, 65-75%-os relatív páratartalom, 10-11000 lux megvilágítás és 8 órás éjszaka - 16 órás nappal fotoperiódus). Az így kapott tíz csíranövény növényhajtás részeit a gyökerek eltávolítása után 1 ppm indolecetsav + 1 ppm benzilaminopurin + 0,1 ppm gibberellinsav növekedésszabályozókat tartalmazó — a példa elején ismertetett — táptalajra oltjuk. (250 ml-es Erlenmeyer lombikban 100 ml táptalaj van.) Az indolecetsavat és benzilaminopurint sterilizálás előtt adjuk a táptalajhoz, míg a gibberellinsavat sterilre szűrve, utólag adagoljuk a kb. 40 °C-osra lehűlt táptalajhoz. A növényeket kb. 4 hétig a fent leírt klimatizált viszonyok között tartjuk, amíg intenzív levélrózsa képződés (oldalhajtás indukció) indul meg. Az oldalhajtásokat steril körülmények között leválasztjuk és egyenként 1 ppm a-naftilecetsavat + 0,1 ppm kinetint tartalmazó Nitsch-féle táptalajra oltjuk. Kéthetes inkubáció után a 4—8 mm hosszúságú gyökerekkel rendelkező növényeket növekedésszabályozó nélküli táptalajra oltjuk és tovább neveljük. Tíz csiranövényből kiindulva 11-12 hét múlva 145 db gyökeres növényt kapunk. A steril tenyészetben kb. 4-6 cm nagyságú gyökérrel rendelkező növényeket homok.perlit 1:1 arányú, 70% vízkapacitásig telített keverékét tartalmazó cserepekbe ültetjük és fitoboxban, ellenőrzött körülmények között a szabadföldi viszonyokhoz szoktatjuk. A fitoboxban a levegő relatív páratartalma 70%. a fényerősség 16000 lux. A nappali/éjszakai hőmérsékletváltást 21/15°C-ra állítjuk. A tápanyagutánpótlást makro-, és mikroeleme- 4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 két tartalmazó oldattal végezzük (módosított Knoppoldat). Kezdetben a növények 100%-os páratartalmat igényelnek, ezért a cserepeket 4-6 napig üvegburával fedjük. A fitoboxban a fent leírt körülmények között a növények megerősödnek és szabadföldbe kiültethetők. Az egy csíranövényből származó utódok morfológiai homogenitását a levélszám, levélhossz, levélszélesség Chi2 értékeivel jellemezzük, (x*)- A kapott értékek számértékei kisebbek Sváb, J.: Biometriai módszerek a kutatásban, Mezőgazdasági Kiadó, Budapest 1973. c. könyvében található Weber, E. (1963)-féle táblázatból leolvasott értékeknél. Tehát nincs szignifikáns különbség a levélhossz és levélszéiességben az egyes utódok között, azaz az állomány homogén. (1. táblázat) 1. táblázat Növényszám db Levélszám db Levélhossz cm (11 levél átlaga) Levélszélesség cm (11 levél átlaga) 1. 14 3,6 1,29 2. 13 3,12 1,26 3. 19 3,25 1,26 4. 12 3,71 1,48 5. 11 3,64 1,25 6. 12 3,77 131 7. 13 3,25 1,45 8. 12 3,34 1,50 9. 11 3,47 1,43 _ . X2 (számított) 20,65 21,23 (táblázatból leolvasott) 39,3 39,3 2. példa Gyűszűvirág vetőmagot a következő módon felszíni sterilezésnek vetjük alá: — mosás detergenssel, — vizes öblítés,- áztatás 70%-os alkoholban 5 percig,- mosás steril vízben,- áztatás 5%-os Na-hipoklorit oldatban 5 percig, — mosás háromszori steril vízzel. A sterilezett magvakat 0,8%-os csapvizes agar-agaron 26 ± 1 °C. 70% relatív páratartalom mellett 50 lux megvilágítással 4—5 napig csíráztatjuk. A kikelt csíranövényeket Linsmaier-Skoog-féle táptalajra oltjuk [Linsmaíer és Skoog, Physiol. IS, 100-127, 1965)], melynek összetétele a következő: NH4NO3 KNO3 CaCl2-2H20 MgS04*7H20 KH2P04 Fe(ll) EDTA komplex oldat* H3BO3 MnS(VH:0 ZnS04-4H:0 KJ NajMoOj • 2H20 CuS04-5H20 CoC12-6H20 inozit B[ vitamin 1650.0 mg/l 1900.0 mg/1 440.0 mg/1 370.0 mg/1 170.0 mg/1 5.0 ml 6,2 mgA 22.3 mgA 8,6 mg/1 ■ 0.83 mg/1 0,25 mg/1 0,025 mgA 0,025 mg/1 100.0 mg/1 1.0 mgA
