183384. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vinkrisztin előállítására
1 183 384 2 A találmány tárgya új, tökéletesített eljárás vinkrisztin előállítására. Vinkrisztint már korábban is előállítottak vinblasztinból. Például a 3,899,943 számú Amerikai Egyesült Államok beli szabadalmi leírás szerint dikrómtrioxidos oxidációt végeznek jégecet-aceton elegyben, -60 °C-on. Ilyen módon a vinkrisztint 50 %-os kitermeléssel állítják elő a vinblasztin mennyiségére vonatkoztatva. Az ilyen oxidáció azonban hátrányokkal jár. Gyári berendezéseknél nehéz alacsony reakcióhőmérsékletet fenntartani; magasabb hőmérsékletek azonban fokozzák a nemkívánatos melléktermékek képződését. A krómsavas oxidációt acetonban végrehajtva 5’-acetonil-vinblasztin és egy rokon dehidratációs tennék képződik nemkívánt melléktermékként, mivel az 5’-acetonilvegyületet a vinkrisztintől kromatográfiával el kell választani és ez a kívánt termékek mechanikai veszteségét eredményezi. Ezenfelül a dikróm-trioxidos oxidációnál jelentős mennyiségű N-dezformil-vinkrisztin képződik, még alacsony hőmérsékleten is. Ezt a dezformilvegyületet reformilezni kell a vinkrisztin kitermelés növelése céljából. A reformilezés egy további, nélkülözhetetlen művelet, amikor a krómsavas oxidáció az oxidált termék deformilezésével jár. A találmány szerint eljárást dolgoztunk ki vinkrisztin előállítására, mely szerint vinblasztin-szulfát-oldatot körülbelül -20° és -40 °C közötti hőmérsékleten oxidálunk savas vasdiperklorát-hidrogén-peroxid oxidáló keverék segítségével, a reakciókeveréket. erősen meglúgosítjuk és belőle a képződött vinkrisztint kivonjuk. Oxidáló reagensként előnyösen perldórsav-vas-diperklorát-hidrogén-peroxid keveréket használunk melyet Groves és munkatársai számos közleményben leírtak [J. Am. Chem. Soc. 96, 5274 (1974); 97, 7118 (1975) és 98, 859,5290(1976)]. A reakciót a reagenseket közösen oldó közömbös oldószerben, előnyösen acetonitrilben hajtjuk végre -20° és -40 °C között. A következő példák a találmány szerinti eljárás bemutatására szolgálnak. 2. példa 170 mg vas-diperklorát-víz (l/6)-ot acetonitrilben oldunk és keverés közben, —20 C-ra lehűtve nitrogéngázt vezetünk bele. 142 mg vinblaszíin-szulfát és 1 ml acetonitril keverékét szobahőmérsékleten elkeverjük 0,135 ml 70 %-os perklórsawal. Ezt az oldatot a lehűtött vas-diperklorát oldathoz adjuk. A reakciókeverék színe világos zöldesbama lesz. 1,22 ml 30 %-os hidrogén-peroxid 10 ml acetonitrillel készült oldatából nitrogéngázzal a levegőt kihajtjuk, majd az oldatot a vinblasztinszulfát-perklorát-perklórsav oldathoz adjuk 25 perc alatt, a hőmérsékletet közben mintegy —20 °C-on tartva. A hozzáadás befejezése után a reakciókeveréket még 20 percig keverjük, majd a reakciót hirtelen leállítjuk 1 ml 15 %-os vizes dinátrium-diszulfit hozzáadásával. A keveréket még 10 percig keverjük, majd körülbelül 0 C-ra lehűtött 10 ml 14 mólos vizes ammóniumhidroxid-oldathoz adjuk. A keverék térfogatát metiléndiklorid hozzáadásával 30 ml-re egészítjük ki. A szerves réteget elválasztjuk és a vizes réteget 15 ml metiléndikloriddal extraháljuk. A szerves kivonatokat egyesítjük és 10 ml 14 mólos vizes ammónium-hidroxid-oldattal, majd négyszer 10 ml 7 pH-jú foszfát pufferrel, végül 10 ml telített vizes nátrium-klorid oldattal mossuk. A szerves fázist megszárítjuk és az oldószereket vákuumban lepároljuk. A 12 mg sötétpiros olajból álló maradékot preparatív vékonyrétegkromatográfrával tisztítjuk négy szilikagéllel bevont lemezt (20X20X0,025 cm) használva. A kromatogramokat 0 °C-on fejlesztjük ki 10 % metanolt tartalmazó metilén-dikloriddal. A vinkrisztinnek megfelelő sávokat kézzel lekaparva és eluálva 14 mg rózsaszínű üveges anyagot kapunk, amely a vinkrisztin szabad bázis fizikai jellemzőivel rendelkezik (11 % kitermelés). Op.: 218-220 °C (bomlás), [a$5 = = +17,0° (c = 1, etiléndiklorid). 2. példa 104 mg vinblasztin-szulfátot 5 ml acetonitrilben oldunk. A reakciókeveréket lehűtjük körülbelül —20 °C- ra és közben nitrogéngázt áramoltatunk át rajta. 249 mg vas-diperklorát és 0,1 ml 70 %-os perklórsav keverékét adjuk hozzá. Ezután a —20 °C-on tartott kevert' oldathoz 0,22 ml 30 %-os hidrogén-peroxid-oldatot és 1 ml acetonitrilt adunk 20 perc alatt. A reakciókeveréket még 15 percig keverjük —20 °C-on, majd szárazjég-aceton fürdővel körülbelül -60 °C-ra lehűtve hirtelen 5 ml 14 mólos vizes ammónium-hidroxid-oldatot adunk hozzá. Ezután 1 ml 15 %-os vizes dinátrium-diszulfitoldatot adunk a keverékhez, majd leszűrjük és a szüredéket 40 ml metilén-dikloriddal mossuk. A szerves szürletet kétszer 20 ml 14 mólos ammónium-hidroxidoldattal és háromszor 7 pH-jú foszfát pufferrel mossuk. A szerves réteget megszárítjuk és az oldószert vákuumban lepároljuk. 65 mg nyers vinkrisztint kapunk piros olaj alakjában. A nyers vinkrisztint szilikagéllel fedett 20X 20X0,025 cm-es preparatív vékonyrétegkromatografáló lemezekre visszük fel. A kromatogramot 0 °C-on 10 % metanolt és 3 % izopropanolt tartalmazó metiléndikloriddal fejlesztjük ki. A 0,6 mg vinkrisztin szabad bázist (0,7 % kitermelés) e lemezek egyikéről izoláljuk, 3,0 mg vinkrisztin-N-oxiddal együtt. Az N-oxid további dinátrium-diszulfitos mosással vinkrisztinné alakítható át. 3. példa 100 mg vinblasztin szabad bázist 1,5 ml .acetonitrilben oldunk, 25 ml-es gömblombikba töltjük és lehűtjük -30° és —35 °C közötti hőmérsékletre. A lombik tartalmát nitrogéngázzal átfúvatjuk. 268 mg vas-diperklorát-víz (l/6)-ot adunk hozzá és a lombikba ismét nitrogéngázt vezetünk be. 0,18 ml jégecetet, majd 15 perc alatt 1 ml 10 %-os acetonitriles hidrogén-peroxidoldatot adunk hozzá (ennek előállítása: 0,13 ml 30 %-os vizes hidrogén-peroxid-oldatot 10 ml-es mérőlombikba mérünk be és jelig acetonitrillel töltjük fel). A reakciókeveréket 3 óráig keverjük mintegy -32 °C-on. 1 g Hyflo Supercelt (diatómaföldből álló szűrési segédanyag), majd 1,5 ml 14 n vizes ammónium-hidroxidoldatot és 1,5 ml 15 %-os vizes dinátriumdiszulfit-oldatot adunk hozzá. A reakciókeveréket keverés közben környezeti hőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, majd leszűrjük. A szűrletet kétszer 50 ml és 40 ml metiléndikloriddal extraháljuk. A szerves kivonatokat egyesítjük és 30 ml telített vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk. 5 10 15 20 25 :o 35 40 45 50 55 60 65 2
