183325. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nitrocsoporttal szubsztituált új apovinkaminol-3',4',5'-trimetoxi benzoátok előállítására
1 183 325 2 A találmány tárgya eljárás új (la) képle tű (-)-9-nitroapovinkaminol-3’,4:,5’-trimetoxi-benzoát és/vagy az (Ib) képletű (-)-l l-nítro-apovinkaminol-3’,4’,5’-trimetoxibenzoát, valamint savaddíciós sóik előállítására. Az (la) és/vagy (Ib) képletű vegyületeket a (II) képletű új (—)-apovinkaminol-3’,4’,5’-trimetoxi-benzoát nitrálása útján állítjuk elő. A kapott termékkeveréket kívánt esetben (la) és (Ib) képletű komponensekre szétválasztjuk, és kívánt esetben ezek savaddíciós sóit képezzük. Az apovinkaminol és acetátja, valamint szívkoszorúérre gyakorolt hatásuk már ismert [2 035 784 számú francia szabadalmi leírás] . Ismert továbbá az apovinkaminol-benzoát általános értágító hatása [166 476 számú magyar szabadalmi leírás; CA 82, 129 279v (1975)], valamint az apovinkaminol 3—12 szénatomos alkánkarbonsavakkal alkotott észterei agyi értágító hatása [171 662 számú magyar szabadalmi, leírás, mely megfelel a 4 108 996 számú amerikai egyesült államokbeli és a 26.32.118 számú NSZK-beli szabadalmi leírásoknak]. Az eddig ismert apovinkaminol-észterek tehát mind értágító hatásúak. Ezzel szemben a találmány szerinti új (la) és (Ib) képletű vegyületek, valamint a (II) képletű kiindulási anyag, a foszfodiészteráz enzim aktivitását gátolják, és elsősorban kóros sejt-proliferációval járó bőrbetegségek gyógyítására, illetve e betegségek kimúlásának megelőzésére használhatók. A (II) képletű új kiindulási anyag előállításmódját az 1. példa végén megadj uk. Az epidermis kóros prolife rációjával járó megbetegedések viszonylag gyakoriak és a lakosság néhány százalékát érintik. Ezek között a betegségek között jó- és rosszindulatúak egyaránt előfordulnak, így például psoriasis atopias dermatitis, primer kontakt dermatitis, allergiás kontakt dermatitis, baso- és spinocellularis karcinoma, ichthyosis, premalignus hyperkeratosis, fény indukálta keratosis, acne és seborrhoeas dermatitis. Bizonyos kórformák csak emberen, mások emberen és állaton egyaránt előfordulhatnak. Minthogy a kóros sejt-proliferációval járó bőrbetegségek egy része, így például a psoriasis állatokon nem fordul elő, a vegyületek psoriasis elleni hatását állatkísérletekkel csak indirekt módon lehet valószínűsíteni. Voorhees és munkatársa [Arch. Derm. 104, 359—365 (1971)] megállapította, hogy a kóros sejt-proliferációt a ciklusos-adenozin-monofoszfát (c-AMP) szintjének csökkenése kíséri. Mint ismeretes a c—AMP adenílcíkláz hatására keletkezik és foszfodiészteráz hatására bomlik el. Voorhees eredményesen befolyásolta a psoriasisos folyamatot olyan szerekkel, melyek az adenilcikláz működését stimulálják, (például norepinephrin), vagy amelyek a foszfodiészteráz működését gátolják (például papaverin). Modell-kísérleteink megtervezésénél abból a feltevésből indultunk ki, hogy Voorhees megállapítása fordítva is igaz: ha egy vegyület esetében bizonyítható, hogy gátolja a foszfodiészteráz működését, akkor ez a körülmény indirekt módon valószínűsíti, hogy a vegyület psoriasis vagy más kóros sejt-proliferációval járó bőrbetegségek gyógyítására alkalmas. A feltevés utólag igazolódott: amely vegyületeknél in-vitro foszfodiészterázgátló hatást találtunk, azok a klinikai kísérletben is beváltak psoriasis kezelésére. A modell-kísérleteket állati testszövetekből (patkányagy, marhaagy, marhaszív) izolált foszfodiészteráz segítségével végezzük. Az enzim-izolálás J. Schröder ésH. V. Richenberg módszerével [Biochem. Biophys. Acta 302, 50 (1973)] történt, majd az izolált foszfodiészterázt J. G- Hardman és E. W. Sutherland módszerével tisztítottuk [J. Biol. Chem. 240, 3704 (1965)] s végül a tisztított enzim aktivitását G.Pöch rádióizotópos módszerével triciált c-AMP fölöslege (0,1 mmól c-AMP szubsztrát, melyből a 3H—c—AMP 2,59 kBq) jelenlétében inkubációs rendszerben először a gátlószer nélkül, majd a 9-nitro-, illetve ll-nitro-apovinkaminol-3’,4’,5’-trimetoxi-benzoát, mint gátlószer jelenlétében 20 perc inkubálási idő után megmértük [N. S. Arch. Pharmacol. 268, 272 (1971)]. A vizsgált vegyületből 1 mmólos sósavasvizes törzsoldatot készítettünk, s a törzsoldat segítségével az inkubált enzim-preparátumhoz különböző mennyiségeket adtunk úgy, hogy az inkubált mintában a vegyület koncentrációja 5X1CT7, IaICT6, 5XKT6, 1X1CT5, 5X1 CT5 és 10"4 mól/liternek feleljen meg. Analóg módon adtuk az enzimpreparátumhoz a referencia-anyag (papaverin) vizes oldatát is. A kontroll (gátlószer nélküli enzim-oldat) aktivitását 100%-nak vettük, és a 9-nitro-, illetve 11-nitro-apovinkaminol-3’,4’,5’-trimetoxi-benzoátot, valamint papaverínt tartalmazó oldatok aktivitását a kontroll százalékában fejeztük ki. A patkányagyból preparált enzimen mért eredmények a következők: Vizsgált vegyület (enzim-inhibitor) A vizsgált vegyület 5X1Ú6 lxlú5 5X1CT5 mól/liter koncentrációjú oldata hatása az enzim-aktivitásra a kontroll %-ában (-)-l 1-nitro-apovinkaminol-3’,4’,5’-trimetoxi-benzoát.HCl 53,6 44,4 37,3 (-)-9-nitro-apovinkaminol-3’,4’,5’-trimetoxi-benzoát.HCl 62,9 61,6 37,7 Papaverin.HCl 91,2 89,7 60,5 Analóg módon mértük a marhaszív preparátumból nyert enzimen is az eredményeket. Az eredmények felhasználásával grafikonon ábrázoltuk az enzim-aktivitást a H mólban kifejezett enzim-inhibitor koncentráció logaritmusa függvényében, és a görbékről leolvastuk azt az enzim-inhibitor koncentrációt, mely 50%-kal csökkenti az enzim-aktivitást (I50). A kapott eredményeket az alábbi táblázat mutatja: Vizsgált vegyület m mólban kifejezett 15 0 értékek marhaszívbó'l patkányagyból kipreparált foszfodiészteráz enzimen (-)-l 1-nitro-apovinkaminol-3’,4’,5’-trimetoxi-benzoát.HCl 1 8 (-)-9-nitro-apovinkaminol-3’,4’,5’-trimetoxi-benzoát.HCl 1 15 Papaverin.HCl 50 70 A táblázatból látható, hogy új vegyületeink marhaszívből izolált enzimen 50-szer és patkányagyból izolált enzimen 4,5—9-szer hatásosabbnak bizonyultak, mint a referencia-anyagként alkalmazott papaverin. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
