183201. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológia eljárás kolánsav-származékok előállítására

1

183 201

2

A 9. példában közöltek szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy az Arthrobacter CA-35-A589-47 törzs helyett Arthrobacter CA-35-A-1448 törzset (FERM-P 5 No. 5526, ATCC No. 31656) használunk fel. 49,30 g szilárd anyagot kapunk, amely a fermentációs termékek és az át nem alakult kólsav elegye.

Az elegyet a 6. példában ismertetett körülmények között nagysebességű folyadékkromatográfiás elemzés- to nek vetjük alá.

A kromatogramot a 9. ábrán mutatjuk be. A kromatogram A, B,C és D csúcsa — hiteles mintákkal végzett összehasonlítás alapján — rendre a 7«-hidroxi-3,12-diketo-5/3-kolánsavnak, 3a,7a-dihidroxi-12-keto-50-kolán- 15 savnak, 7a,12a-dilridroxi-3-keto-5(3-kolánsavnak és kólsavnak felel meg.

Az A, B, C és D csúcsnak megfelelő frakciókat elkülönítjük, majd vékonyrétegkromatográfiásan vizsgáljuk.

A B, C és D csúcsnak megfelelő frakciók csak egy vegyü- 20 letet tartalmaznak, míg az A csúcsnak megfelelő frakció a 7a-hidroxi-3,12-diketo-5j3-kolánsav mellett egy további azonosítatlan anyagot is tartalmaz.

Az egyes termékek hozamát, valamint az át nem alakult kólsav mennyiségét a 9. ábrán feltüntetett kroma- 25 togram alapján, az egyes görbeszakaszok alatti területek arányából számítottuk ki. Az eredményeket a 12. táblázatban közöljük.

12. példa

A 9. példában közöltek szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy az Arthrobacter CA-35-A589-47 törzs helyett Arthrobacter CA-35-A-1475 törzset (FERM-P No. 5527, ATCC No. 31657) használunk fel. 49, 35 g szilárd anyagot kapunk, amely a fermentációs termékek és az át nem alakult kólsav elegye.

A kapott elegyet a 6. példában ismertetett körülmények között nagysebességű folyadékkromatográfiás elemzésnek vetjük alá.

A kromatogramot a 10. ábrán mutatjuk be. A kromatogram A, B, C és D csúcsa - hiteles mintákkal végzett összehasonlítás alapján - rendre a 7a-hidroxi-3,12-diketo-5(3-kolánsavnak, 3a,7a-dihidroxi-12-keto-50-kolánsav iák, 7a,12a-dihidroxi-3-keto-5(3-kolánsavnak és kólsavnak felel meg.

\z A, B, C és D csúcsnak megfelelő frakciókat elkülönítjük, majd vékonyrétegkromatográfiásan vizsgáljuk. Valamennyi frakció csak egy vegyületct tartalmaz.

\z egyes termékek hozamát, valamint az át nem alakult kólsav mennyiségét a 10. ábrán feltüntetett kromatogram alapján, az egyes görbeszakaszok alatti területek arányából számítottuk ki. Az eredményeket a 13. táblázatban közöljük.

13. példa

12. táblázat

Vegyület

Konverzióarány, %

Hozam, g

7a-Hidroxi-3,12-diketo-5(3-kolánsav + egy azonosítatlan anyag (A csúcs)

6,5

3,20

3a,7a-Dihidroxi-12-keto-5j3-kolánsav (B csúcs)

88,0

43,39

7a,12a-Dihidroxi-3-keto-5/3-kolánsav (C csúcs)

0,3

0,15

Egyéb származékok

0,1

0,05

Kólsav (D csúcs)

5,1

2,51

13. táblázat

Vegyület

Konverzió arány, %

Hozam, g

7a-Hidroxi-3,12-diketo-5/3-kolánsav (A csúcs)

3,26

1,61

3a,7a-Dihidroxi-12-keto-5(3-kolánsav (B csúcs)

92,0

45,40

7a,12a-Dihidroxi-3-keto-5í3-kolánsav (C csúcs)

0,20

0,10

Egyéb származékok

csekély

mennyiség

Kólsav (D csúcs)

4,54

2,24

21