183201. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológia eljárás kolánsav-származékok előállítására
1 183 201 2 A 9. példában közöltek szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy az Arthrobacter CA-35-A589-47 törzs helyett Arthrobacter CA-35-A-1766-15 törzset (FERM-P No. 5528, ATCC No. 31658) használunk fel. 49,27 g szilárd anyagot kapunk, amely a fermentációs termékek és az át nem alakult kólsav elegye. Az elegyet a 6. példában ismertetett körülmények között nagysebességű folyadékkromatográfiás elemzésnek vetjük alá. A kromatogramot all. ábrán mutatjuk be. A kromatogram A, B és D csúcsa - hiteles mintákkal végzett összehasonlítás alapján — rendre a 7a-hidroxi-3,12-diketo-5/3-kolánsavnak, 3a,7a-dihidroxi-l 2-keto-5/?-kolánsavnak és kólsavnak felel meg. Az A, B és D csúcsnak megfelelő frakciókat elkülönítjük, majd vékonyrétegkromatográfiásan vizsgáljuk. Valamennyi frakció csak egy vegyületet tartalmaz. Az egyes termékek hozamát, valamint az át nem alakult kólsav mennyiségét all. ábrán feltüntetett kromatogram alapján, az egyes görbeszakaszok alatti területek arányából számítottuk ki. Az eredményeket a 14. táblázatban közöljük. 14. példa A 9. példában közöltek szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy az Arthrobacter CA-35-A589-47 törzs 5 helyett Arthrobacter CA-35-M-965-3 törzset (FERM-P No. 5529, ATCC No. 31659) használunk fel. 49,36 g szilárd anyagot kapunk, amely a fermentációs termékek és az át nem alakult kólsav elegye. Az elegyet a 6. példában ismertetett körülmények 10 között nagysebességű folyadékkromatográfiás elemzésnek vetjük alá. A kromatogramot a 12. ábrán mutatjuk be. A kromatogram A, B és D csúcsa - hiteles mintákkal végzett összehasonlítás alapján — rendre a 7a-hidroxi-3,12-di- 15 keto-50-kolánsavnak, 3a,7a-dihidroxi-12-keto-5|9-kolánsavnak és kólsavnak felel meg. Az A, B és D csúcsnak megfelelő frakciókat elkülönítjük, majd vékonyrétegkromatográfiásan vizsgáljuk. Az A csúcsnak megfelelő frakció a 7a-hidroxi-3,12-diketo-5j3- 20 kolánsav mellett egy további azonosítatlan anyagot is tartalmaz, míg a B és a D csúcsnak megfelelő frakció csak egy vegyületet tartalmaz. Az egyes termékek hozamát, valamint az át nem alakult kólsav mennyiségét a 12. ábrán feltüntetett kroma- 25 togram alapján, az egyes görbeszakaszok alatti területek arányából számítottuk ki. Az eredményeket a 15. táblázatban közöljük. 15. példa 14. táblázat Vegyület Konverzióarány, % Hozam, g 7a-Hidroxi-3,12-diketo-5|3-kolánsav (A csúcs) 0,23 0,11 3a,7a-Dilúdroxi-12-keto-5j3-kolánsav (B csúcs) 97,02 47,80 Egyéb származékok 0,75 0,37 Kólsav (D csúcs) 2,0 0,99 15. táblázat Vegyület Konverzióarány, % Hozam, g 7a-Hidroxi-3,12-diketo-5/3-kolánsav + egy azonosítatlan anyag (A csúcs) 8,6 4,24 3a,7a-Dihidroxi-12-keto-5|3-kolánsav (B csúcs) 85,3 42,11 Egyéb származékok 2,0 0,99 Kólsav 4,1 2,02 22
