183201. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológia eljárás kolánsav-származékok előállítására
1 183 201 2 A 9. példában közöltek szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy az Arthrobacter CA-35-A589-47 törzs helyett Arthrobacter CA-35-A849 törzset (FERM-P No. 5524, ATCC No. 31654) használunk fel. 49,34 g szilárd anyagot kapunk, amely a fermentációs termékek és az át nem alakult kólsav elegye. Az elegyet a 6. példában ismertetett körülmények között nagysebességű folyadékkromatográfiás elemzésnek vetjük alá. A kromatogramot a 7. ábrán mutatjuk be. A kromatogram A, B, C és D csúcsa — hiteles mintákkal végzett összehasonlítás alapján — rendre a 7a-hidroxi-3,12-diketo-50-kolánsavnak, 3a,7o!-dihidroxi-l 2-keto-5(3-kolánsavnak, 7a,12a-dihidroxi-3-keto-50-kolánsavnak, illetve kólsavnak felel meg. Az A, B, C és D csúcsnak megfelelő frakciókat elkülönítjük, majd vékonyrétegkromatográfiásan vizsgáljuk. Valamennyi frakció csak egyetlen vegyületet tartalmaz. Az egyes termékek hozamát, valamint az át nem alakult kólsav mennyiségét a 7. ábrán feltüntetett kroma, togram alapján, az egyes görbeszakaszok alatti területek arányából számítottuk ki. Az eredményeket a 10.táblázatban közöljük. 10. példa A 9. példában közöltek szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy az Arthrobacter CA-35-A589-47 törzs helyett Arthrobacter CA-35-A-1071-15 törzset (FERM-P No. 5525, ATCC No. 31655) használunk fel. 49,31 g szilárd anyagot kapunk, amely a fermentációs termékek és az át nem alakult kólsav elegye. A kapott elegyet a 6. példában ismertetett körülmények között nagysebességű folyadékkromatográfiás elemzésnek vetjük alá. A kromatogramot a 8. ábrán mutatjuk be. A kromatogram A, B, C és D csúcsa — hiteles mintákká! végzett összehasonlítás alapján — rendre a 7a-hidroxi-3,12-diketo-5/3-kolánsavnak, 7cc,3a-dihidroxi-l2-keto-5|3-kolánsavnak, 7a,12a-dihidroxi-3-keto-50-kolánsavnak és kólsavnak felel meg. Az A, B, C és D csúcsnak megfelelő frakciókat elkülönítjük, majd vékonyrétegkromatográfiásan vizsgáljuk. A B, C és D csúcsnak megfelelő frakciók csak egy vegyületet tartalmaznak, míg az. A csúcsnak megfelelő frakció a 7«-hidroxi-3,12-diketo-5j3-kolánsav mellett egy további azonosítatlan anyagot is tartalmaz. Az egyes termékek hozamát, valamint az át nem alakult kólsav mennyiségét a 8. ábrán feltüntetett kromatogram alapján, az egyes görbeszakaszok alatti területek arányából számítottuk ki. Az eredményeket all. táblázatban közöljük. 11. példa 5 10 15 20 25 10. táblázat Vegyület Konverzióarány, % Hozam, g 7a-Hidroxi-3,12-diketo-5|3-kolánsav (A csúcs) 3,2 1,58 3a,7a-Dihidroxi-12-keto-5|3-kolánsav (B csúcs) 83,5 41,20 7a,12a-Dihidroxi-3-keto-5ű-kolánsav (C csúcs) 7,9 3,90 Egyéb származékok 2,8 1,38 Kólsav (D csúcs) 2,6 1,28 11. táblázat Vegyület Konverzióarány, % Hozam, g 7a-Hidroxi-3,12-diketo-5|3-kolánsav + egy azonosítatlan anyag (A csúcs) 5,2 2,56 3a,7a-Dihidroxi-12-keto-50-koIánsav (B csúcs) 93,9 46,30 7a,12a-Dihidroxi-3-keto-5(3-kolánsav (C csúcs) 0,2 0,10 Egyéb származékok 0,2 0,10 Kólsav (D csúcs) 0,5 0,25 20
