182997. lajstromszámú szabadalom • Eljárás módosított intakt erithrociták előállítására
1 182 997 2 : firss vörösvérsejtek. A nyíl a hemoglobin 30 Torr oxigén parciális nyomásnál történő leadását jelzi. A 3. ábrán az oxigén megkötési görbék pH-függését mutatjuk be 25 °C-on széndioxid távollétében. A vörös vérsejteket 17 napon át 4°C-on 0,10 mólos pH=7,4 értékű 0,154 mól/liter nátriumkloridot tartalmazó izotoniás bisz-trisz-pufferben tároljuk.----------------------: PH 7,72; : pH 7,08.--------------------pH 7,42; A nyíl a hemoglobin 30 Torr oxigén parciális nyomás mellett mutatott csökkentett telítettségét jelzi. A 4. ábrán az eritrocitákban levő hemoglobin 25 °C- on széndioxid távollétében mutatott Bohr-effektusát mutatjuk be. A vörös vérsejteket 17 napon át 4 °C-on 0,10 mólos pH=7,4 értékű 0,154 mól/liter nátriumkloridot tartalmazó izotóniás bisz-trisz-pufferben tároljuk. Az 5. ábrán az inozit-hexafoszfátnak a vörös vérsejtekbe való irreverzibilis beépülését mutatjuk be. Az eritrociták oxigén féltelítettség! nyomását 25 °C-on széndiöxid távollétében a V2 közvetítésével pH=7,6 értéken történő IHP beépítés előtt és után mérjük. A vörös vérsejteket 4 °C-on 0,10 mólos pH=7,4 értékű 0,154 mól/liter nátriumkloridot tartalmazó izotóniás bisz-triszpufferben tároljuk. O O Q-Q- : vörös vérsejtek polifoszfátokban való elszegényedésének görbéje; □ **■ □ inozit-hexafoszfáttal 7,6 pH-értékre való feltöltés és inozit-hexafoszfáttal töltött vörös vérsejtek tárolása 4 °C-on. A <—■* A : inozit-hexafoszfáttal 7,6 pH-értéken való feltöltés és az inozit-hexafoszfáttal töltött vörös vérsejtek tárolása 37 °C-on. Az IHP beépülését standard körülmények között végezzük el. A 6. ábrán az inozit-hexafoszfáttal töltött eritrociták 25 °C-on széndioxid távollétében mutatott Bohr-effektusát mutatjuk be.-0-0-0- = inozit-hexafoszfátnak V2 által közvetített beépülése 7,6 pH-értéken: □ □ □ = inozit-hexafoszfátnak V2 által közvetített beépülése 7,8 pH-értéken. A vörös vérsejteket 4 °C-on 0,1 mólos pH=7,4 értékű 0,154 mól/liter nátriumklorid-tartalinú izotóniás bisztrisz-pufferben tároljuk. Az IHP beépítését standard körülmények között végezzük el. A 7. ábrán a vesikulum összetételének az „oxigénmegkötési izotermák jobbra tolódására” kifejtett hatását mutatjuk be; a mérést 7,6 pH-értéken 25 °C-on széndioxid távollétében végezzük. Az IHP beépítését 7,6 pH- értéken standard körülmények között végezzük el. A sejteket 7,6 pH-értékű izotóniás pufferben szuszpendáljuk. — : vörös vérsejteket 19 napon át izotóniás, 0,10 mólos, 7,4 pH-értékű, 0,154 mól nátriumkloridot tartalmazó bisz-trisz-pufferben tároljuk;------------------ vörös vérsejtek a V! által közvetített IHP-feltöltés után; : friss vörös vérséjtek;------------------- : vörös vérsejtek a V2 által közvetített IHP-feltöltés után. A nyíl a hemoglobin 30 Torr oxigcnparciális-nyomás alatti csökkentett telítődését jelzi. A 8. ábrán az IHP-tartalmú vesikulumok 37 °C-on mutatott stabilitását tüntetjük fel.-0 0 0- = V2 vesikulumok;-ET □ 6- = V3 vesikulumok. A vörös vérsejtek vesikulumok által közvetített IHP- telvételét 7,4 pH-értéken standard körülmények között végezzük el. Az inozit-hexafoszfáttal töltött eritrociták I'o2(1/2) értékét 25 °C-on széndioxid távollétében mérjük. A 9. ábrán J 4C-koleszterinnek vesikulumokból intakt eritrocitákba való beépülésének kinetikáját tanulmányozzuk. Az inkubálást 37 °C-on pH=7,4 értékű 0,1 mólos 0,154 mól nátriumkloridot tartalmazó izotóniás bisz-trisz-pufferben végezzük el. A 10. ábrán 14C-koleszterinnek V2-vesikulumokból intakt eritrocitákba való beépülésének kinetikáját tanulmányozzuk. A radioaktivitást az eritrociták extrahált lipidjeiben mérjük. Az inkubálást a 9. ábrával kapcsolatban ismertetett körülmények között végezzük el. All. ábrán 14C-koleszterinnek lipid-vesikulumokból a hela-sejtek által való felvételének kinetikáját mutatjuk be. Az inkubálást 37 °C-on 7,4 pH-értéken foszfáttal pufferolt nátriumklorid-oldatban végezzük el. A 12. ábrán a 14C-koleszterin felvétel pH-függését mutatjuk be. A körülmények all. ábrán megadottakkal azonosak. A 13. ábrán az inkubációs közeg pH-jának az inozithexafoszfáttal töltött eritrociták oxigén-féltelítettségi nyomására kifejtett hatását mutatjuk be. A P02 (1/2) éréket 25 °C-on szén-dioxid távollétében mérjük. A 14. ábrán az eritrociták V2 közvetítésével inozitiiexafoszfáttal 7,38 pH-értéken, IHP jelenlétében, külső közegben történő feltöltésének kinetikáját tanulmányozzuk. Az 57 napos vörös vérsejtek inkubálását standard körülmények között végezzük el. A Pq2( 1/2) értéket 25 °C-on széndioxid távollétében mérjük. A 15. ábrán az inkubációs közeg pH-értékének a V2 iltal közvetített IHP-beépülés felezési idejére kifejtett hatását mutatjuk be. A vörös vérsejteket standard körülnények között inozit-hexafoszfáttal külső közegben incubáijuk. A P02O/2) értéket 25 °C-on széndioxid távolétében mérjük. A 16. ábrán az IHP eritrocitákba történő, V2 által közvetített, 7,4 pH-értéken, IHP távollétében külső közegben történő beépülésének kinetikáját mutatjuk be. \z inkubálást standard körülmények között végezzük el. P02 (1/2) értéket 25 °C-on széndioxid távollétében határozzuk meg. A 17. ábrán az eritrociták 7,4 pH-értéken V2 által közvetített inozit-hexafoszfáttal történő feltöltése előtti is utáni oxigén-megkötési görbéket mutatjuk be. \z inkubálást standard körülmények között 7,6 pH-értéken végezzük el. Az eritrociták által történő oxigén leidást az agy számára kritikus 30 Torr oxigén parciális nyomással szemben nyíllal jelöljük:-------------- :41 napos eritrociták (02-leadás 5%) 25 °C-on;-------------- : inozit-hexafoszfáttal töltött eritrociták (O2 -leadás 47%) 37 °C-on; : 41 napos eritrociták (02 -leadás 21%); : inozit-hexafoszfáttal töltött eritrociták (02 -leadás 80%). Az eritrocitákban levő hemoglobinnak a kapillárisokban való oxigén-leadásának mértéke nem csak a vénás vér oxigén parciális nyomásától, hanem mindenekelőtt a 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
