182988. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bisz-indol vegyületek előállítására
1 182 988 2 órán át keverjük 50 °C hőmérsékleten. Ezután a 3. példa b) bekezdésében leírt módon feldolgozzuk a reakcióelegyet. A kapott 5’-nor-leurozin azonosnak bizonyult azzal a mintával, amelyet az 1. példában leírtakhoz hasonló módon állítottunk elő. Hozama 35 mg (93%). Jellemzői az alábbiak: IR (CHCla) 3350, 2950, 1750 cm-1 (C = 0,5 CHCI3) [a]p°° =32°, UV (EtOH) Xmax.: 217, 270, 285 (váll) 293 (váll) 211 nm DC (EtOH) X nm: 215 (-), 220 (+), 255 (+), 280 (—), 310 (+). SM csúcsok m/e, 810, 796, 794, 761, 750, 656, 649, 637, 633, 598, (100%) 538, 522, 496, 480, 469, 450, 449, 448, 369, 367, 340, 331, 329, 282, 240, 238, 222, 210, 208,188, 174, 165, 154, 152, 135, 122, 121, 107. NMR1 H (CDCI3): 8,31 (s, 1H, NaH): 7,55 (1H, aromás); 7,06 (3H aromás); 6,30 (s, 1H, C9 —H) 6,00 (s, 1H, Ct 2 —H); 5,76 (dd, JH, Ji4,is = 10 és J3,14) = 4Hz, Ci 4—H); 5,31 (s, 1H, C17-H); 5;23 (d, 1H, J14,15 = 10, C15—H); 4,30, 4,11 (2d, Jó’a, 6>b = 13 Hz, C6>—H); 3,76, 3,73 és 3,66 (3s, 9H, Ch-OCH3, C16-C02CH3 és C16,-C02CH3);2,66(s, 3H, Na—CH3); 2,05 (s, 3H, COCH3); 1,05 és 0,66 ppm (2t, 6H, J 2 7 Hz, C, 8 -H és C2 8 .-H). 6. példa a) Na-dezmetil-Na-formïl-leurozin-7-klór-indolenin előállítása 60 mg Na-dezmetil-Na-formil-leurozin vagy leuformin (0,072 mmól) 6 ml vízmentes metilénkloriddal készített oldatához argon atmoszférában 0 °C-on keverés közben hozzáadunk 14 mg N-klór-benzotriazolt (0,092 mmól). A reakcióelegyet két órán át keverjük, azptán 20 °C alatti hőmérsékleten csökkentett nyomáson szárazra bepároljuk. A maradékhoz 1,5 ml metanolt és 10 ml 40%-os vizes nátriumkarbonát oldatot adunk, és a terméket benzollal extraháljuk. Az extraktumot vízzel mossuk, nátriumszulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott nyers terméket szilikagél rétegen való kromatografálással tisztítjuk. Eluálószerként ammóniával telített 95 :5 térfogatarányú kloroform-metanol elegyet használunk. 52 mg (85%) Na-dezmetil-Na-formil-leurozint kapunk, amelynek jellemzői az alábbiak: IR (CHCI3); 3000, 1760, 1690, 1600 cm'1. UV (EtOH) X max. : 226, 256, 310 nm. EtOH+OH+) X max.: 225, 254, 298 nm. DC (EtOH) X nm: 205 (-), 235 (+); 258 (+), 295 (-), 325 (+). EtOH+H+) X nm: 230 (+); 255 (+); 295 (+)■ SM: 836, 822, 616, 365, 282, 149, 133, 122(100%) 121. b) 5’-nor-Na-dezmetil-Na-formil-leurozin előállítása 50 mg (0,07 mmól) Na-dezmetil-Na-formil-leurozin- 7’-k!ór-indolenin 4 ml 50 : 50 térfogatarányú tetrahidrofurán-víz eleggyel készített oldatához szobahőmérsékleten keverés közben hozzáadunk 20 mg (0,1 mmól) AgBF4-et. A reakcióelegyet 16 órán át keverjük 20°C-on, azután éterrel extraháljuk 10%-os vizes nátriumkarbonát oldat jelenlétében. Az extraktumot nátriumszulfáton megszárítjuk, azután csökkentett nyomáson bepároljuk. A nyers terméket szilikagél-rétegen végzett kromatográfiával tisztítjuk. Eluálószerként ammóniával telített 95 :5 arányú kloroform-metanol elegyet használunk. 20 mg (40%) 5’-nor-Na-dezmetil-Naformil-leurozint kapunk, amelynek jellemzői az alábbiak: IR (CHCI3): 3400, 2950, 1750, 1680 cm'1. UV (EtOH) X max.: 222, 260, 286, 295 nm. DC (EtOH) X: 205, (-); 225 (+); 225 (+); 298 (+). SM csúcsok m/e: 824, 822, 764, 612, 610, 584,494, 282, 154,.152, 144, 136(100%) 122,121. NMR1 H(CDC13): 8,70 (s, 1H, OH) 8,41 (s, oldal, 1H, Na,-H); 8;12 (0,5 H) és 7,70 (0,5 H); NaCHO; 7,62 (d, J = 7 Hz 1H, aromás); 7,12 (m, 3 H aromás) 6,76 (s, 1H, C9-H); 6,64 (2s, 1H, Cj2-H) 5,86 (dd, J14 is = 10 Hz J3 14 — 3Hz, 1H, C14-H); 5,33 .(d, JM,il = 10, 1H, C 5-H), 5,16 (2s, 1H, C] 7 —H); 4,70 és 4,45 (2s, 1H, C-ï —H); 4,32 (d, JAb = 12 Hz, 1H, C6.H’; 3,92; 3,76 és 3,68 (3s, 9H) Ci,OCH3, C16C02CH3, C16,C02CH3); 2,05 (2s, 3H, OCOCH3); 1,07. (t, J18,19 = 7 Hz, 3H) és 0,70 (t, J1 s, 19 = 7 Hz, 3H) Ci s — H) és Ci s i H. Az I általános képletű vegyületek daganatgátló hatással rendelkeznek, ezért különféle sejtburjánzással járó betegségek, így például a leukémia kezelésére használhatók. A találmány tárgyát képezi olyan gyógyászati kompozíciók előállítása is, amelyek hatóanyagként I általános képletű vegyületeket tartalmaznak. Az alábbiakban ismertetjük azoknak az in vitro és in vivo farmakológiai vizsgálatainknak az eredményeit, amelyeket az előbbi példákban bemutatott vegyületekkel végeztünk. 1. Tubulin polimerizációjának gátlása A vinblasztin típusú daganatgátló hatású indol alkaloidok szubsztrátja a tubulin. Ezt a sertés agyvelőből lehet kivonni, ahol az oldható proteinek mintegy 10%-át képezi. A tubulin mikrotubulusokká való polimerizációját könnyen követhetjük UV spektrofotométerrel 350 nm-nél. Meghatározzuk a polimerizáció sebességének maximumát. Ez vinblasztin-típusú inhibitorok hozzáadásakor csökken, és egy adott koncentrációnál, melyet I50-nel jelölünk, a polimerizáció sebessége az eredetinek a felére csökken. Megfigyeltük e vegyületek más hatását is. Nevezetesen nagyobb dózisokban, a polimerizáció teljes gátlása után hatásukra bekövetkezik a tubulin spirállá való átalakulása. Ezt elektronmikroszkópiával figyelhetjük meg. Az e jelenséget 50%-ig előidéző koncentrációt Sso-nel jelöltük. Kísérleteinkhez összehasonlító anyagként vinblasztint használtunk. A kísérleti vegyületek és a tubulin közötti kölcsönhatásra vonatkozó vizsgálataink eredményeit, amely vizsgálatokat a tartarátokkal végeztünk, az I. táblázatban foglaljuk össze. Megegyezzük, hogy a tubulin koncentrációja mintegy 2 mg/ml. I. táblázat Vegyület ^5 0^5 0 vinblasztin(a) S50I&50 vinblasztin 5 ’-nor-anhidrovinblasztin 0,7 0 bo 1 0 12-klór-5’-nor-anhidro-13 Yinblasztin anhidrovinkrisztin 1,8 1,5 Í’-nor-anhidrovinkrisztin 0,8 0,66 5’-nor-leurozin 1,0 3 5’-nor-Na-dezmetil-Na-2,7 7 2,5-formil-leurozin 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
