182866. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tetrapeptid-származékok előállítására
1 182 866 2 Mikor az átalakított tetrapeptidet, mely a C-terminális csoportot tartalmazza, előállítottuk, a tirozilon levő O-védőcsoport (ha jelen van) hidrogenolízissel és az N-BOC-védőcsoport trifluorecetsawal való kezeléssel eltávolítható. 5 A fentiekben csak egy műveleti sorrendet írtunk le az I általános képletű vegyületek előállítására, azonban ettől eltérő sorrend is alkalmazható. Más eljárás, amely az említett vegyületek előállítására felhasználható, magában foglalja az egyes aminosavaknak vagy származé- 10 kainak a karboxiamid-csoporttal kezdődő peptid lánc szerkezetében, lépésenként történő beépülési sorrendjét. Az eljárásnál a fentiekben leírt reakciótechnika, valamint bármely más, elméletileg meghatározott műveleti sorrend alkalmazható. 15 Az I általános képletű vegyületek szilárd-fázis szintézis alkalmazásával is előállíthatok. Ebben az eljárásban a C-terminális maradék egy megfelelő polimer hordozóhoz kapcsolódik, majd a peptid hossza, egy-egy csoporttal, addig növekszik — még mindig a polimer hordozó- 20 hoz kapcsolódva - amíg a kívánt peptid kialakul. A pepiidet ezután egy megfelelő leválasztó szerrel eltávolítjuk a hordozóról. Például, a C-terminális gyököt, mely az a-amino-csoportnál egy terc-butiloxikarbonil-csoporttal védett, DCC aktiválási reakcióval egy benzhidrilamin 25 polimerhez kapcsoljuk. Az N-BOC csoportot a polimerhez kötött maradéknak trifluorecetsawal metilénkloridban való reakciójával lehasítjuk, eltávolítjuk. Az így nyert sót egy alkalmas tercier amínnal semlegesítjük, és ezt a sorrendet ismételjük minden egymás 30 után következő aminosav hozzáadásakor addig, amíg termékként a kívánt pepiidet nyerjük. Ezt a védett peptidet azután 0 °C hőmérsékleten, hidrogénfluoridos kezelést alkalmazva, a polimer hordozóról eltávolítjuk. A terméket kromatográfiás eljárással tisztítjuk. A jel- 35 lemző reakciókörülmények, mégpedig a reakcióidő, reakcióhőmérséklet, mosási idő, reagensek, védőcsoportok és hasonlók a gyakorlati szilárdfázisú peptidszintézisben jártas szakemberek számára jól ismertek. Ha az I általános képletű vegyületeknél az R4 csoport 40 valamely 1-3 szénatomos primer alkilcsoport, akkor az alkalmas N-szubsztituált aminosavat alkalmazzuk a peptid előállításánál. Bármely N-monoszubsztituált aminosav az alábbi műveleti sorrend szerint, kiindulási anyagként valamely N-védett aminosavat alkalmazva, elő- 45 állítható: H KH K+ BOC-N-(AA)-COOH---------------------> BOC-N'-(AA)-COO'K+ i 18-korona-6-éter THF DMF 1-3 szénatomos primer alkiljodid (Ral) \ BOC-N-(AA)-COOH Mint a fenti reakcióvázlat jelzi, az N“-védett aminosavat először a dianion előállítása céljából káliumhidriddel kezeljük egy megfelelő korona-éter jelenlétében. A keletkezett intermediert ezután az alkalmas alkil- 65 jodiddal kezeljük és ily módon a kívánt N-szubsztituált aminosavat nyerjük. A peptid-szintézisben jártas szakember számára nyilvánvaló, hogy az a-szénatomnál erősen alkálikus körülmények között, mint például a fent leírt alkilezési eljárásnál, racemizáció léphet fel. A racemizáció foka erősen függhet attól az amino-vegyülettől, melynél a racemizáció végbemegy. A racemizáció a minimumra csökkenthető a lehető legrövidebb reakcióidő és feleslegben levő alkilezőszer alkalmazásával. Azonban, ha igen nagy mértékű racemizáció lép fel, akkor is lehet a terméket átkristályosítással tisztítani, úgy mint egy megfelelő kiral amin sóját, például mint a d(+)a-feniletilamin sóját. A termékként nyert aminosav, melyben R4 jelentése valamely 1-3 szénatomos primer alkilcsoport, bármely, a fentiekben leírt eljárással, a.megfelelő amiddá átalakítható. Ha az I általános képletű vegyületeknél az R5 jelentése valamely 1—3 szénatomos primer alkilcsoport, akkor az alkalmas a-szén-szubsztituált aminosavat, vagy az ennek megfelelő amid-származékot alkalmazzuk az előállítás műveletei Során. Az a-szén-szubsztituált fenilalanin rész a Stein et al., Journal of the American Chemical Society, 77. kötet, 700-703 (1955) közleményben leírt eljárással állítható elő. A racém-keverék bomlása a Turk et al., J. Org. Chem., 40, 7, 953-955 (1975) közleményben leírt eljárással érhető el. Az így nyert a-szubsztituált fenilalanin a fentiekben leírt eljárásokkal a megfelelő amiddá, alkohollá vagy nitrillé átalakítható. Ez a művelet kivitelezhető a tetrapeptid előállítása előtt vagy után, bár sokkal előnyösebb ezt a tetrapeptid előállítása előtt végrehajtani. Az I általános képletű vegyületek értékes gyógyszerek. Fájdalomcsillapító aktivitással rendelkeznek, és különösen alkalmasak emberek és emlős állatok parenterális úton történő kezelésére. Az I általános képletű vegyületek alkalmazhatók tisztán, vagy parenterális kezelésre alkalmas gyógyszerkészítményekkel együtt, egységnyi mennyiségben. Az alkalmazott vegyület vagy készítmény tartalmazhat szerves vagy szervetlen, szilárd és/vagy folyékony, farmakológiailag elfogadható hordozót. E célra megfelelő hordozó a szakemberek számára jól ismert. A készítmények lehetnek tabletta, granulátum, kapszula, szuszpenzió, oldat és hasonló módon formulázva. Az I általános képletű vegyületek, hatásos mennyiségben alkalmazva, fájdalomcsillapító hatást mutatnak. Az adagolás mértéke általában a következő: minden testsúly-kilogrammra számítva körülbelül 0,1-100 mg, előnyösen körülbelül 1,0-20 mg. A következő példák az I általános képletű vegyületek előállításának és aktivitásának illusztrálására szolgálnak, de nem korlátozzák a találmányt. 1. példa Az L-tirozil-D-alanil-glicil-ÍN^-metilj-L-fenilal anil amid acetát-só előállítása A. Benzil-D-alinát-p-toluolszulfonát 55,1 g (0,29 mól) p-toluolszulfonsav-monohidrátot tartalmazó 100 ml benzdalkohol és 200 ml benzol elegyéhez 25 g (0,281 mól) D-alanint adunk. A keveréket visszafolyató hűtő alkalmazásával forrási hőmérsékletre melegítjük, és a vizet Deaa-Stark'készülékben azeotropos 5
