182790. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 17béta-hidroxi- 5-androsztén-származékok előállítására
182.790 lus sphaericua ATCC-7055» Nocardia gardneri IAM-105, Nocardia minima IAM-374, Nocardia corallina IF0-3558, Streptomyces rubescens IAM-74 vagy főleg a Mycobacterium avium IF0-3082, Myoobacterium phlei IF0-3158, Mycobacterium phlei 0KI-20, Mycobacterium phlei ATCC-354, Mycobacterium smegmatia IF0-3084, Mycobacterium smegmatis ATCC-20, Mycobacterium.smegmatia 0KÎ-27, Mycobacterium smegmatia ATCC-19979» Mycobacterium foruitum CBS-49556, Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 és Mycobacterium spec. NNKL-B-3683. A tenyésztést az ilyen mikroorganizmusok esetén szokásosan alkalmazott, süllyesztettf levegőztetett körülmények között végezzük. Ezután adjuk a tenyészethez a szubsztrátot, valamely megfelelő oldószerrel készített oldatként, vagy előnyösen emultealt formában, és a fermentációt a maximális szubsztrátátalaitáaig végezzük. A szubsztrát megfelelő oldószerei például a metanol, etanol, glikolmonometileter, dimetilformamid vagy dimetilszulfoxid. A szubsztrát emulgeálását például úgy végezhetjük, hogy mikronizált alakban vagy először egy vízzel elegyedő oldószerben, például metanolban, etanolban, acetonban, glikolmonometlléterben, dimetilformamidban vagy dimetilszulfoxidban oldva erős zavaros cdás fellépte közben adjuk a szokásos emulgeálószereket tartalmazó - és előnyösen ionmentesitett - vízhez. A fermentációs eljárás során alkalmazott kiindulási anyagok ismertek, vagy önmagukban ismert módszerekkel állíthatók elő, lásd J. Pharm.Soc. 54, /1965/, On.J.Chem.49, 2418 A971/, Synthesis 1975, 276 és 1976, 244. Tetrahedron Letters 1976, 809, Cn.J.Chem. 50, 2788 /1972/ és Bull.Soc.Chim.France I960, 297-A következő példákban a kiindulási anyagok előállítását és a találmány szerinti eljárást részletesebben ismeftetjük. A/ Példák a kiindulási anyagok előállítására alkalmazott mikrobiológiai oldallánc-lebontás szemléltetésére 1. példa a/ 750 ml-es Erlenmeyer-lombikba 200 ml steril táptalajt mérünk, mely 1% élesztőextraktumot, 0.48 % dinátriumhidrogénfoszfátot, 0,34 % káliumhidrogénfoazfatot és 0,2 % Tagat/«/-02- -t tartalmaz, és pH-ja. 6,7. majd Mycobacterium spec. NBKL-B-3805 törzs ferde tenyészetéről lemosott sejtszuszpenzióval oltjuk be, és 3 napon át 190/perc frekvenciával 30 C° hőmérsékleten rázatjuk. b/ 40 liter, 1.23 % 68 %-os élesztőextraktumot, 0,68 % káliumdihidrogénfoazfatot és 0,2 % Tagat/»'-02-t tartalmazó pH 6,0 mértékű táptalajjal töltött 50 literes fermentort a fenti Mycobacterium-tenyészet 200 ml-ével beoltunk, és 30 G° hőmérsékleten 2 a’/óra levegőztetés mellett 48 órán át inkubáljuk. c/ 400 g koleszterint 6 liter formaldehid-dimetilacetálban oldunk, szobahőmérsékleten történő keverés közben 400 ml szilikagélt és részletekben 200 g foszforpentoxidot adunk hozzá, és 2 órán át szobahőmérsékleten keverhetjük. Az oldhatatlan részeket kiszűrjük, formaldehid-óimetilaoetállal mossuk és az ^oldószert vákuumban ledesztilláljuk. Nátriumhidrogénkarbonát}-oldat hozzáadása után a szilárd nyersterméket leszűrjük, vízzel mossuk, és szárítás után 440 g 3^-/metoxi-metoxi/-5-kolesztént kapunk. Az acetonból átkrisztályositott termék 79-80 C°-on 3
