182776. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új metabolitok előállítására

182.776

Az előbbi előtenyészet 100 liternyi mennyiségével 500 liter következő összetételű közti tenyésztő táptalajt oltunk be 750 literes acél fermentorban: malátakivonat /szirup/ 50 g

élesztőkivonat 10 g

16,68 mg 6,88 mg

ionmentesitett viz 1 literre

FeS 0^, • 7H?0 ZnSO^.TH^O

Tenyésztési körülmények: 4 nap 21°-on, 100 ford./perc,

0.5 bar és 0,5 liter/perc/liter táptalaj levegőztetési sebesség.

d/ Főtenyészet

A közti tenyészettel beoltunk 5000 liter lc/példa szerinti termelő táptalajt egy 4500 literes acélfermentorban. A tenyésztést 5 napon át 21^-on végezzük, 0,5 bar nyomáson és 1,0 liter/perc/liter táptalaj levegőztetesi sebesség mellett.

3. példa

Az S 41062/F-l, 3 41062/F-6 és S 41062/F-7 vegyület elkülönítése

300 liter, a 2. példa szerint előállított fermentlé pH- ját hig kénsav vagy nátriumhidroxid segítségével 6-7-re állítjuk be és a micélium osapadékot Westphalia szeparátorral elválasztjuk a tenyészet szürletétől.

A nedves micéliumot Dispax reaktorban mennyisége tízszeresének megfelelő mennyiségű metanollal homogenizáljuk és a folyadékfázist elkülönítjük. Ezt az eljárást 90 ?j-os vizes metanollal kétszer megismételjük. A szürleteket egyesitjük, vákuumban metanol-mentesitjük, majd háromszor extraháljuk etilacetáttal és egyszer 4:1 etilacetat/izopropanol eleygyel. A kivonatokat vákuumban oldószer-mentes itjük és a maradékot tízszeres mennyiségű 90 %-os vizes metanolban oldjuk. Hexánnal végzett mosás után a poláris fázist vákuumban ismét szárazra pároljuk.

Ezt a maradékot 1,5 liter 78í20:2 arányú metilénklorid: metanol:viz elegyben oldjuk és 20 kg azilikagélen Ale^ck, 0,05- -0.2 mm/ végzett krómatografálássál megosztjuk az oldatot, az előbbi oldószer-elegy mint eluálószer alkalmazásával. 13 literes frakciókat kapunk.

A Candida elblcans-szal szemben ak tivitást mutató 8. és

89. az. frakciót, amely elsősorban az S 41062/F-l és S 41062/F-7 vegyületet tartalmazza, egyesitjük és 1,5 kg Sephadex LH 20-on /metanolban, 25 ml/frakcio/ krómatografaljuk, mimellett a két metabolit a 42.-62. frakcióban jelentősen feldúsul.

Ezeknek a frakcióknak a betöményitett maradékát 4 részre osztjuk szét és mindegyik hányadot 1,2 kg azilikagélen Aíeick H, 10 cm átmérőjű oszlopokon/ kromatografáljuk 4:1 arányú me~ tilénklorid:metanol elegy alkalmazásával! 100 ml-es frakciókat fogunk fel.

A frakciók maradékait vékonyréteg-kromatográfiásan vizsgáljuk, a tisztaság meghatározására és a tiszta frakciókat e— gyesitjük. Tiszta S 41062/F-l-t találunk a kb. 75-85« frakcióban, tiszta S 41062/F-7-t pedig a 40-65. frakcióban.

Az S 41062/F-l-t tartalmazó betöményitett maradékokat metanolban oldjuk, egyesitjük, aktiv szénnel kezeljük és az oldatokat talkum rétegen át tisztára szűrjük. A csaknem színtelen

12