182670. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-karbamoil-pirrol-propionitrilek előállítására
182670 (1976)] vagy a prosztaglandin-szintetáz gátlása, amely tesztet a Biochem. 10, 2372 (1971) ismertet'. A következő vizsgálati módszer szemléletesen is bemutatja a hatást, és a következő adatokat szolgáltatja: 250—300 g súlyú Charles River-patkányokat 0,1 ml Bacillus Calmette Guerin- (BCG) vakcina intradermális injekciójával immunizálunk. A kísérleti állatoknak egy hét után — a makrofágok feldúsításának kiváltása céljából — 10 ml steril 2%-os rizskeményítőoldatot adagolunk intraperitoneálisan. Az immunizálás utáni 11. napon elpusztítjuk az állatokat, és a peritoneális makrofágokat 20 ml heparint tartalmazó (25 egység/ml) Gey-féle pufferezett sóoldatba gyűjtjük. A sejteket 10 percen át centrifugáljuk, 1000 fordulat/perc fordulatszámmal, majd további 50 ml Gey-féle oldattal — azonos sebességgel és időtartammal mossuk — majd 0,1% humán szérumalbumint tartalmazó Gey-féle oldattal szuszpendáljuk (V frakció, Sigma Co., pH = 7,1), hogy 2xl06 sejt/ml koncentrációt érjünk el. A vizsgálati anyagokkal 1X102 mólos oldatokat állítunk elő dimetil-acetamiddal. A következő hígításokat Gey-féle oldattal végezzük és végül a fenti sejtszuszpenzióhoz adjuk, hogy a megfelelő 10‘4, 105, 10'a és 10'7 mólos végkoncentrációt elérjük. A szuszpenzió módosított Boyden-féle kemotaxis kamrák felső részébe való bevitele után a fenti vizsgálati anyagok a sejtekkel együtt maradnak. A kemotaxist előidéző szerként patkányszérumot alkalmazunk, amit Escherichia coli lipopoliszacharidjával (Difco), (1:10 arányú hígátással, pH = 7,1) aktiválunk. Ezt a szérumot az említett kamrák alsó részébe visszük be. A sejteket tartalmazó kamrarészt a kemotaxist előidéző oldattól cellulóz szűrőmembránnal választjuk el, amelynek pórusai 8 mikron méretűek. A kamrákat háromszori ismétléssel állítjuk fel, és 5 órán át 37 °C-on inkubáljuk. A sejtvándorlás ellenőrzésére sejtszupszenziót alkalmazunk, amely nem tartalmaz vizsgálandó vegyületet. Az inkubálás után a szűrőt eltávolítjuk, rögzítjük és Weigert szerint vas-hematoxilinnal festjük. A szűrő alsó felületének 4 mezőjét 320-szoros mikroszkópos nagyítással vizsgáljuk. A kemotaxis aktivitásának indexeként a mind a 4 mezőben megszámolt neutorfilek át Tagos számát használjuk. Ebben a vizsgálati eljárásban indometacint és levamizolt is alkalmazunk összehasonlító vegyületként. Az adjuváns-artritisz-tesztben például az 1-metil-ß-oxo-a-fenil-karbamoil-2-pirrol-propionitril, a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek jellemző tagja vágj' a fenti valamely I és II általános képletű vegyület enoléterei vagy enolészterei, sói vágj’ rokonvegj’ületei patkánj-okban orális adagoláskor igen hatásosak, egészen 2 mg/testsúlj’kg/napra csökkentett alkalmazás esetén is. Ezen vegyületek befolyása a BCG-vel immunizált makrofágok in vitro kemotaxisának aktivitására 10“5—10“ 6 mólos koncentrációig csökkentve szignifikáns és a makrofágok kemotaxis reakciójának növekedésében njúlvánul meg. Ezzel szemben az indometacin nem befolyásolja 5 a makrofágok kemotaxisát, viszont a levamizol, amelj' ismert immun potencírozó szer, 10-3—10~5 mólos végkoncentrációnál megnövekedett vándorlást idéz ele. \ fenti vizsgálati módszerek utalnak mind a találmány szerinti eljárással előállított vegj'ületek kedvező hatására, mind pedig más iránj'ú hatásmechanizmusára, amit ezek a vegyületek más, nemszteroid gj’ulladá ^gátlókkal szemben felmutatnak. A makrofág-kemota.cis-tesztben mutatott aktivitás hasonló a levamizoléhoz, amelj'et reumaellenes, a betegséget is befolyásoló gyógyszerként soroltak be. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek, amelj'ek hatása mind indometacin-típusú, mind pedig levamizol-típusú, értékes gj'ulladásgátló és artritisz elleni szerek, például a gj'ulladásos artritiszes és/vagjT de ’matopatológiás állapotok ellenőrzésére vágj’ kezelésére. Az új vegj’ületek ezen túlmenően más értékes, különösen a farmakológiában hatásos készítmények kö hanyagaiként is alkalmazhatók. \z I általános képletű vegyületek közül azok különösen előnyösek, amelj’ek képletében Pl jelentése l-[(rövidszénláncú)-alkil- vágj’ Ph-(rövidszénláncú)-alkiI]-2- vagy -3-pirrolil-csoport, amely a fennmaradó helj’zetekben szubsztituálatlan vagy egy vágj’ két rövidszénláncú alkilcsoporttal és rövidszénláncú -alkoxi-karbonil-csoporttal szubsztituáltak, Ph jelentése fenilesoport, ami lehet szubsztituálatlan vagy rövidszénláncú alkilcsoporttal, rövidszénláncú alkoxicsoporttal, rövidszénláncú alkil-tiocsoporttal, hidroxilcsoporttal, halogénatommal, trifluor-metil-csoporttal, nitrocsoporttal vágj’ aminocsoporttal és rövidszénláncú álkanoil-aminocsoporttal egyszeresen vágj’ kétszeresen, azonosan vágj’ eltérően szubsztituált, és R jelentése hidrogénatom vágj’ rövidszénláncú alkilcsoport ; e vegyületek enol-(rövidszénláncú )-alkiléterei vagy enol-(rövidszénláncú)-alkanoilészterei vágj’ bázisokkal képzett sói, különösen bázisokkal képzett, gyógj’ászatbai alkalmazható sói. Különösen kiemelendők az I általános képletű vegj’ületek szűkebb körét képező II általános képletű vegyületek, amelj’ek képletében R, jelentése rövidszénláncú alkilcsoport, R2 és R3 jelentése hidrogénatom, vagy rövidszénláncú alkilcsoport és R4 és Rs jelentése hidrogénatom, rövidszénláncú alkilcsoport, rövidszénláncú alkoxicsoport, hidroxilcsoport, halogénatom vágj’ trifluor-metil-csoport, vágj’ ezek bázisokkal képzett sói, különösen bázisokkal képzett, gyógyászatban alkalmazható sói. Előnj’ösek továbbá azok a II általános képletű vegyületek, amelj’ek képletében R, jelentése legfeljebb 4 szénatomos alkilcsoport, R2 és R3 jelentése hidrogénatom és 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
