182565. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4'-szubsztituált-2,4-diklór-alfa-(imidazol-N-il-metil)-dibenziléterek előállítására
182 565 ismert anyagok. A 4-klórmetil-difenil előállítását a Chem. Ber. 66B, 1471 (1933) közlemény, az 1-brómmetil-4-feniltio-benzol előállítását pedig a 3242193 sz. Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás ismerteti. Az (I) általános képletű 4’szubsztituált 2,4 -diklóra-(imidazol-N-il-metil)-dibenziléterek sóit önmagukban ismert módszerekkel állíthatjuk elő, például úgy, hogy a 4'-szubsztituált 2,4-diklór-a-(imidazol-N-ilmetil)-dibenzil-éter-bázishoz ekvimoláris mennyiségű savat adunk, majd a képződött sót megfelelő oldószerből kristályosítjuk. Miként már korábban említettük, az (I) általános képletű új vegyületek és sóik értékes farmakológiai aktivitással rendelkeznek, és elsősorban gombák, élesztők és Gram-pozitív aerob és anaerob baktériumok ellen hatásosak. Az új vegyületek további előnyös tulajdonsága, hogy toxicitásuk csekély. A következőkben a találmány szerint előállított új vegyületek farmakológiai aktivitására és toxicitására vonatkozó kísérleteket ismertetjük. A kísérletekben összehasonlító anyagokként két jól ismert gombaellenes hatóanyagot, nevezetesen (imidazol-l-il)-oc-(O-klórfenil)-a,a-difenil-metánt (Clotrimazolt) és 2,2',4,4'tetraklór-a-(imidazol-N-il-metil)-dibenzilétert (Miconazolt) használtunk fel. A kísérletek eredményeit az 1—3. táblázatban foglaljuk össze. Az 1. táblázatban a találmány szerint előállított új vegyületek és az összehasonlító anyagok akut toxicitási adatait (LDS0-értékeit) tüntettük fel. A vegyületek toxicitását ismert módszerekkel határoztuk meg egereken, orális adagolás esetén, és mg/kg egységekben adtuk meg. A 2. táblázatban a találmány szerint előállított új vegyületek és az összehasonlító anyagok gombaellenes és élesztőellenes hatására jellemző minimális gátló koncentráció-értékeket foglaltuk össze. A minimális gátló koncentráció-értékeket ismert módon, sorozathígításos eljárással határoztuk meg; a táptalajt az egyes lépésekben mindig kétszeresére hígítottuk. A 3. táblázatban a találmány szerint előállított új vegyületek és az összehasonlító anyagok Gram-pozitív baktériumokkal szemben kifejtett hatására jellemző minimális gátló koncentráció-értékeket tüntettük fel. A minimális gátló koncentráció-értékeket ebben az esetben is sorozathígításos eljárással határoztuk meg. A „minimális gátló koncentráció” megjelölésen azt a legkisebb hatóanyag-koncentrációt értjük, amely még gátolja a vizsgált gombák, élesztők, illetve baktériumok növekedését. A kísérleteket a következő körülmények között végeztük : a) Gombákon végzett kísérletek : A gombákat 5,7-es pH-értékű folyékony Sabouraud táptalajon 7 napon át 25 °C-on inkubáltuk. Minden egyes kémcsőbe 5 ml táptalajt töltöttünk. Az oltóanyagot a következőképpen állítottuk elő: A vizsgálandó gomba 10 napos agaros tenyészetét 10% polioxietilén-szorbitán-monooleátot (Tween 80-at) tar5 talmazó fiziológiás oldattal mostuk, majd a mosófolyadékot gézen leszűrtük. A szűrőlepényt fiziológiás oldatban szuszpendáltuk. A szuszpendálószer menynyiségét úgy választottuk meg, hogy a képződött szuszpenzió Coleman JR II típusú spektrofotométeren 650 nm hullámhosszon mért átlátszósága (T) 50% legyen. 5 ml táptalaj beoltásához 0,1 ml így kapott spóraszuszpenziót használtunk fel. Aspergillus niger esetén a szűrőlepényt 1:10 arányban hígítottuk fiziológiás oldattal, és 5 ml táptalaj beoltásához szintén 0,1 ml így kapott spóraszuszpenziót használtunk fel. b) Élesztőkön végzett kísérletek : Az élesztőgombákat 5,7-es pH-értékű folyékony Sabouraud-táptalajon 48 órán át 37 °C-on inkubáltuk. Minden egyes kémcsőbe 5 ml táptalajt töltöttünk. Az oltóanyagot a következőképpen állítottuk elő: Az élesztőgombákat folyékony Sabouraud-táptalajon 24 órán át növekedni hagytuk. Cryptococcus neoformans esetén 2 napos növekedési időt alkalmaztunk. Az élesztősejteket centrifugálással (6500 fordulat/perc) elkülönítettük, majd újból a fenti fiziológiás oldatban szuszpendáltuk. A szuszpendálószer mennyiségét úgy választottuk meg, hogy a képződött szuszpenzió Coleman Jr II típusú spektrofotométeren 650 nm hullámhosszon mért átlátszósága (T) 50% legyen. 5 ml táptalaj beoltásához 0,1 ml így kapott spóraszuszpenziót használtunk fel. c) Gram-pozitív baktériumokon végzett kísérletek: A baktériumsejteket 7,3-es pH-értékű tripszin-szója táptalajon 18 órán át 37 °C-on inkubáltuk. Minden egyes kémcsőbe 5 ml táptalajt töltöttünk. Az oltóanyagokat a következőképpen állítottuk elő : A kísérlet végrehajtása előtti napon a vizsgálandó mikroorganizmusokat a megfelelő táptalajokon 18 órán át 37 °C-on inkubáltuk. Ezután a kapott szuszpenziókat a felhasznált táptalajjal 1:100 arányban hígítottuk. 5 ml tripszin-szója táptalaj beoltásához, amely 0,009—160 y/ml hatóanyagot tartalmazott, 0,1 ml így készített baktériumszuszpenziót használtunk fel. 6 1. táblázat Hatóanyag Egéren meghatározott akut toxicités LI>5o mg/kg p.o. 2,4-Diklór-4'-fenil-a-(imidazol-N-ilmetil)-dibenziléter (új vegyület) 2400 2,4-Diklór-4'-feniltio-a- (imidazol-N-il metil)-dibenziléter (új vegyület) 3000 2,2',4,4'-Tetraklór-a-(imidazol-N-ilmetil)-dibenziléter (Miconazol, összehasonlító anyag) 870 (lmidazol-l-il)-a-(0-klór-fenil)-a,adifenil-metán (Clotrimazol, összehasonlító anyag) 880 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
