182544. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidroxi-alkil-purinok aminoalkanollal és p-acetamido-benzoesavval alkotott komplexei előállítására
182 544 28 27 Maximális százalékos változás (folytatás) Vegyület Limfokin (makrofág mitogén faktor) NPT által kiváltott tengerimalac makrofág száma túlburjánzás koncentráció, (xg/ml 0,01—1,0 1,0—10 10—100 15425 15428 15435 15437 15446 15447 15431 15432 15433 15434 0 0 0 15443 15444 + 20 0 15417 13 —50 15418 12 80 —50 15392 33 23 15410 15426 12 23 Néhány vegyületet megvizsgáltunk mitogén által kiváltott egér limfocita túlburjánzásra gyakorolt hatás szempontjából, és a következő eredményeket kaptuk : Vegyület %-oa stimulálás (iig/ml koncentrációnál) NPT száma 0,01—1,0 1,0—10 10—100 >100 15392 >50 30—50 30—50 nem vi?;s-15426 0 0 0 gáltuk nem vizs-15410 >50 30—50 30—50 gáltuk nem vizs-15417 0 0 0 gáltuk 0 15418 20—30 >50 20—30 nem vizsgáltuk Biológiai aktivitás. Immunmodulációs vizsgálat. A következőkben ismertetett három meghatározási módszert használtuk a vizsgált vegyületeknek az immunrendszer különböző sejtcsoportjai aktivitását szabályzó képességeinek értékelésére. Ezekben a rendszerekben lehetséges azonosítani mind az immunpotenciátor aktivitást (amelyet a vizsgált paraméter fokozódása bizonyít), mind az immunszupresszáns aktivitást (amelyet a vizsgált paraméter inhibiálása bizonyít). 1. Mitogén indukált egér lépsejt meghatározási módszer. Egér lépsejtek mind B, mind T limfocitákat tartalmaznak, amelyeket számos idegen anyag (például növényi mitogének, így concanavalin A) serkenthet túl- 10 burjánzásra. Ez a fokozott szaporodás a sejt által közvetített immunitás fokozódásának a jele. Az alábbi módszernél leírjuk a vizsgált anyagok immunpoteneiátorként való értékelésére használt rendszert. Anyagok : 15 Concanavalin A (Calbiochem, La Jolla, California) Lot No. 210073, nátrium-klorid oldatból liofilizálva. Először 1%-os oldatot készítünk, amelyet minden egyes koncentrációnál kétszeresen hígítunk. (0,5; 1,0; 2,5 p.g/ml). 20 Állatok : 6—8 hetes hím Balb/C fajtájú és C3H-fajtájú egereket kaptunk a következő helyekről: Flow Research Animals Inc., Dublin, Virginia; Charles River Breeding Laboratories, Wilmington, Massachusetts; Labo- 25 ratory Supply Company, Indianapolis, Indiana ; Lionel Strong Foundation, San Diego, California. Sejtek : Három—öt egeret leölünk a nyak ficamításával, és a lépeket aszeptikusán eltávolítjuk. Az összegyűjtött 30 lépeket apróra vagdaljuk és steril csipeszekkel rostokra szaggatjuk; majd kétrétegű nylonszitán átpréseljük. A sejtszuszpenziót 5 %borjúembrió-szérummal és antibiotikumokkal kiegészített 15 ml RPMI 1640 oldattal [Science 174, 500 (1971); GIBCO No. 380— 35 2400] mossuk. A sejteket mikro lapokon levő süllyesz- 1 ékekben 106 sejt/0,1 ml koncentrációban tenyésztjük. A tenyészeteket mitogén nélkül vagy mitogénnel 5% széndioxidot tartalmazó nedvesített légtérben 48 órát 'nkubáljuk. A vizsgált vegyületet különböző koncent- 40 rációkban a mitogénnel együtt adjuk a tenyészetekhez. Túlburjánzás (szaporodás). A túlburjánzást 1,0 Ci [3H] timidin 18 órás inkubációs periódus alatti beépülési fokával határozzuk meg. 45 A tenyészeteket többcsatornás automatikus mintagyűjtő egységgel (MASH-unit) (Otto Hiller Co., Madison, Wisconsin) gyűjtjük össze, és a timidin-beépülést folyadékszcintillációs spektrometriával határozzuk meg. Három párhuzamos tenyészetet készítünk, és az 50 adatokat a kísérleti átlagérték standard meghatározási hibájával együtt tüntetjük fel. A vegyületeknek a kontroli-értékekhez képest kapott stimuláló hatását számítjuk és grafikusan is ábrázoljuk. 2. Mitogén által kiváltott humán perifériás vér litn- 55 fociták. Klinikai igény van olyan gyógyszerekre, amelyek fokozzák az immunválaszt olyan pácienseknél, akik hiányos vagy csökkent immunállapotban vannak, ami például vírusfertőzéseknél vagy ráknál fordul elő. 60 A humán perifériás vér limfociták idegen anyagok 15
