182439. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,9-dioxo-11-alfa.16-dihidroxi-16-metil-1-hidroxi-metil-13-transz prosztén előállítására
15 182439 Módszer gyomomedv-szekréciót gátló anyagok hatásának vizsgálatára A vizsgálatokhoz 10—15 kg súlyú nem altatott Mongrel kutyákat alkalmazunk. Az állatoknak idegektől sebészeti úton megfosztott tasakjuk van, mely gravitációval egy titán kannulán keresztül ürül ki. Az állatok oly módon trenírozottak, hogy közel Pavlovi állapotban legyenek. A gyomomedv-kiválasztást hisztaminsav-foszfáttal, 30—50 fig/kg/h dózisban oly mértékben serkentjük, hogy állandó kiválasztást (a maximális 20—40%-a) érjünk el. Ilyen serkentés mellett tartós kiválasztás általában 3 óráig tartható fenn. A gyomomedvet a kiválasztás vizsgálata során 15 percenként folyamatosan összegyűjtjük. Meghatározzuk a gyűjtemények mennyiségét, pH-értékét és savtartalmát. A savtartalmat automatikus titrálóval a gyomorminta aliquot részeinek 0,1 n nátriumhidroxid-oldattal pH-7-es értékig való titrálással határozzuk meg. A vizsgálandó anyagokat a gyomomedv-szekréció maximális serkentése mellett adagoljuk és a kapott ered- 5 ményeket a vizsgálandó anyag alkalmazása nélkül kapott eredményekkel hasonlítjuk össze. Az adott hatóanyag hatásának időtartamától függően előfordulhat, hogy egy egyszerű hatóanyag-kiválasztás vizsgálat saját kontrolljaként alkalmazható. A hatóanyagot orálisan 10 adagoljuk a főgyomorba. Ez az adagolási mód könnyen kivitelezhető és nem interferál a tasak-nedv gyűjtésével. A találmány szerinti l,9-dioxo-lla,16-dihidroxi-16- -metil-l-hidroxi-metil-13-transz-prosztadién 100 mg/kg dózisban a kutyák egyikének gyomrába adagolva a D 15 táblázatban megadott hatást fejti ki. A D táblázatban lévő adatok az egy kutyán végzett négy kísérlet adatainak átlagértékei. 16 D táblázat 1,9-dioxo-lla, 16-dihidroxi-16-metil-l-hidroxi-metil-13-transz-prosztén (100 mg/kg) adagolása után a gyomomedv mennyisége és savtartalma Adagolás után eltelt idő (perc) 0 15 30 45 «0 75 90 105 120 Mennyiség (ml) 3,4 2,6 1,5 1,3 0,7 0,9 1,5 1,9 2,7 Sav (mg/15 perc) 0,43 0,35 0,22 0,20 0,09 0,13 0,21 0,27 P, 40 Gyomorsav-szekréció kutya-fisztulában Három Mongrel kutyát (20—32 kg) sebészeti úton rozsdamentes acél kannulával látunk el. A kannulát a hasi gyomornak legfüggőbb részébe helyezzük és a hason kívülre vezetjük a gyomorváladék összegyűjtésére. Az állatok oly módon trenírozottak, hogy közel Pavlovi állapotban legyenek és a vizsgálat során eszméletüknél vannak. E táblázat 1,9-dioxo-l la, 16-dihidroxi-16-met il-1 -hidroxi-metil-13- -transz-prosztén (A vegyület) hatása gyomorsavszekrécióra a kutya-fisztulában Kezelés Dózis (os/kg I. G.) ni. összetett két órás gyomornedv-szekréció./ mennyiség (ml) sav (mEqH+) kontroll 20 130 ±11 17,2 ±1,6 A vegyület 10 6 39 ±19 6,9 ±2,8 (p <0,01) (p 0,005) B vegyület 10 6 76 ±16 7,5 ±2,1 (p < 0,05) (p< 0,005) a)=26 órás koplalás után, a gyomorsav-szekréciót maximálisan serkentettük, 45 perccel a kezelés megkezdése után, konstans intavénás hisztaminsav-foszfát infúziót (40^/kg/h) alkalmazva. b) =a három kutya mindegyikét 6—7-szer vivőanyaggal (kontroll), majd 1—3-szor a vizsgálandó anyaggal kezeltük. c) =45—120 perc alatti teljes kiválasztás a hatóanyag nak vagy vivőanyagnak intragastrikus (I. G.) beadagolását követően. Megfékezés — Immerziós stressz-fekélyek patkányokon (Wilson) A) Fekély előidézése 150—200 g súlyú hím „Spraque—Dawley származék” 25 patkányokat (Locke-Erickson Laboratories, Maywood, Illinois) koplaltatunk, majd 16—19 órával a vizsgálat megkezdése előtt ivóvizet adunk nekik. A vizsgálat kezdetén (0 időpillanat) a patkányoknak orálisan vizsgálati anyagot, illetve vivőanyagot adunk (közelítőleg 0,5 ml) 30 majd Bollman-típusú ketrecbe helyezzük őket. A dozírozás után 5 perccel az állatokat 100 percig 22 C°-os vízbe merítjük (farokkal lefelé) „vállig”. Ezután az állatokat lenyakazzuk és gyomrukat 5 mm nyelőcsővel és nyombéllel azonnal kivágjuk. 35 Egy tompavégű ollóval a gyomrot a nagygörbület mentén felnyitjuk, a bendőnél kiindulva a mirigynyálkahártyán keresztül a gyomorkapuig és felnyitva egy kis nyombél-darabot a dupla bélszegény mentén. A gyomorból a törmeléket szobahőmérsékleten sós vízben kiöb- 40 lítjük és gézzel vagy szűrőpapírral óvatosan megszárítjuk. A gyomrot ezután a nyálkahártyás felülettel felfelé egy lapon vagy hasonló anyagon kiterítjük. 45 B) Fekélyek értékelése A fekélyeket egy megvilágított nagyító készülékkel megszámoljuk (az összfekély szám megállapítására) és G. Osterloh és társai módszere szerint (Arzneimittel- 50 Forschung, 16/8a/ : 901910, 1966. augusztus) pontozzuk. Az eredményeket az alábbi táblázatban adjuk meg. 9
