182439. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,9-dioxo-11-alfa.16-dihidroxi-16-metil-1-hidroxi-metil-13-transz prosztén előállítására
13 182439 14 képességének megfelelő aggregációt előidéző anyag, például adenosin-difoszfát, epinefrin, trombin vagy kollagén hozzáadásával bekövetkező változásával mérhetjük. A vérlemezke-aggregáció gátlását in vitro mérhetjük olyan állatok különböző időintervallumokból való vérlemezkében gazdag plazmájának felhasználásával is, melyek orális vagy parenterális úton inhibitort kaptak. A találmány szerinti PGE-vegyület az alábbi módszerrel vizsgálva in vitro vérlemezke-aggregációt gátló hatást mutat. Emberi fehérjegazdag plazmát módosult Tyrode oldattal 40—50% fehérjegazdag plazma arányban inkubálunk. A vizsgálandó vegyületeket különböző koncentrációban adjuk hozzá, majd 5 perc inkubálás után valamely aggregációt előidéző anyagot, például adenosindifoszfátot vagy kollagént adunk hozzá. Az optikai sűrűség (fényáteresztő képesség) változását szemmel határozzuk meg. A gátlást (—) jellel, a gátlás hiányát (+) jellel jelöljük. A vegyületeket. hatásosnak tekintjük, amennyiben 0,025 mg/ml vagy annál kisebb koncentrációban 5—10 perc alatt az adenosin-difoszfát vagy kollagén által előidézett aggregációt gátolják. így például a találmány szerinti l,9-dioxo-15-hidroxi-l-hidroxi-metil-13-transz-prosztén, mind az adenosin-difoszfát, mind a kollagén által előidézett vérlemezke-aggregációt 0,025 mg/ml koncentrációban gátolja. A találmány szerinti vegyületek hörgőtágító hatással is rendelkeznek. A vizsgálatokat mesterségesen lélegeztetett altatott kutyákon végezzük, melyeknél pilocarpinnal állandó légzési görcsöt idéztünk elő. A vizsgálatokhoz 5—10 kg testsúlyú mindkét nembeli Mongrel kutyákat alkalmazunk. A kutyákat 1.5 mg/kg szubkután injekció formájában adagolt morfin HCl-lel előkezeljük. A morfin injekció adagolása után Ví órával 5% (W/V) kloralose intravénás perfúziót indítunk be olyan sebességgel, hogy 15 perc alatt 60 mg/kg-ot adagoljunk. Ezt követően a vizsgálat alatt 10 mg/kg/óra folyamatos perfúziót tartunk fenn. A kutyákat Starling szivattyúval mesterségesen lélegeztetjük (20 lélegzet/perc). A mennyiséget az állat súlyának megfelelően állítjuk be. [Kleinman and Radford, J. Appl. Physiol., 19, 360 (1964)]. A vizsgálatokat V alakú, melegített asztalon, hanyattfektetett kutyákkal végezzük. A kurarizálást 3 perces 3 mg/kg-os szukcinilkolin-klorid injekcióval, majd azt követően 0,1 mg/kg/perc dózisú folyamatos perfúzióval végezzük. A légzési görcsöt 5 perces 400 mcg/kg-os pilokarpin-HCI injekcióval idézzük elő. Légúti rezisztencia esetén a pilokarpin-HCI-t kisebb vagy nagyobb dózisban is alkalmazhatjuk. 15 perc múlva, állandó légzési görcs fenntartására, folyamatos pilokarpon-HCl perfúziót indítunk be 4 mcg/kg/perc dózisban. Légcsőmetszés után a légcső felső felébe fém kannulát vezetünk, majd rögzítjük. A két agyi vénát, valamint a két femorális vénát katéterezzük a különböző anyagok befecskendezéséhez. A femorális artériát a szisztémiás vérnyomás mérésére katéterezzük. A mellkasi nyomás mérésére a nyelőcső alsó harmadába nyelőcsőballont (11 cm x 2,5 cm) vezetünk. A levegő áramlást a légcsővezetékhez kapcsolt Fleish pneumotachograph-val mérjük. A transzpulmonális nyomást az alábbiak szerint mérjük: A Iégcső-kannulára, a kannula végétől számított 2.5 cm-re rozsdamentes acélból készült axiális csövet (1,5 mm) szerelünk fel, melynek a középponttól távol eső vége zárt. Ez utóbbi szegmenten 3 db 1 mm átmérőjű mélyedés van. Ezt a csövet, melyet a trachealis nyomás mérésére alkalmazunk, egy Sanborn 267 B/C differencial transzduktor két kamrájának egyikéhez kapcsoljuk. A másik kamrát a ballonnal azonos hosszúságú és tulajdonságú polietilén katéterrel a nyelőcső-ballonhoz kötjük. A levegő áramlást Sanborn 270 differenciál transzduktorral a Fleish pneumotachograph-ból mérjük. A ki- és belélegzett levegő mennyiségét R. C. integrator alkalmazásával az áramjel elektronikus integrálásával kapjuk. A szisztémiás és pulmonális vérnyomást Sanbom 267 B/C vagy 1280 B nyomás transzduktor segítségével mérjük. A 2. elvezetésen elektrokardiogramot veszünk fel. Ennek használata a szív impulzus-számának figyelésére szolgál. Mindezeket az adatokat a Sanborn poligraph feljegyzi. A transzpulmonális nyomást, valamint a ki- és belélegzett levegő mennyiségét egy oszcilloszkóp a derékszögű koordinátákon jelzi ki. A légúti ellenállást cm víz/liter/sec-ben kifejezve, az oszcilloszkóp nyomás és mennyiségi jelének szinkronizálásához szükséges, az áramlással arányos feszültségnek a transzpulmonális nyomás elektromos ekvivalenséből való kivonásával mérjük. [Mead and Whittenberger, J. Appl. Physol., 5, 779 (1953)]. A pulmonális merevséget cm víz/liter/sec-ben kifejezve, ugyanazon elv alapján kapjuk meg, azaz az oszcilloszkóp nyomás-áramlás görbéjének optimalizálására a mennyiséggel arányos elektromos jelet levonjuk a transzpulmonális nyomás jelből. A fenti módszer részleteit Lulling és társai ismertették [Med. Pharmacol. Exp. 16, 481 (1967)]. A számításokat analóg számítógéppel végezzük, mely lehetővé teszi az ellenállás és merevség értékekfolyamatos, közvetlen leolvasását. A vizsgálandó anyagokat Aerosol®-rel adagoljuk. A Bird Mark 7 légzőkészülék mikroaerosol-készülékét a fém kannulára közvetlenül a pneumotachograph után szereljük fel. A vizsgálandó anyag „löketét” (adagját) Aerosol®-ben, a mikroaeroszol-készülékben egy légzési ciklus alatt lévő 2 kg/cm2 nyomással nyomjuk. A mikroaeroszol-készüléket a lélegeztető-csőhöz csak a „löket” alatt kapcsoljuk. A mikroaeroszol-készüléket az adagolás és az adagolás után megmérjük a beadagolt hatóanyag mennyiségének meghatározására. A találmány szerinti vegyületnek a pilokarpin által előidézett görcsre kifejtett százalékos gátló hatását az A táblázatban ismertetjük. Minden egyes kutyának hozzávetőlegesen 50 mg oldatot adagoltunk. A táblázat Hörgőtágító hatás (pilokarpin vizsgálat) %-os görcsgátló hatás 1 Dózis mg/ml A pilokarpin által előidézett %-os görcs gátlása a hatóanyag beadagolása után 1,9-dioxo-l 1 al 6-dihidroxi-16-metil-l -hidroximetil--13-transz-prosztén 3,2 90 90 70 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
