182267. lajstromszámú szabadalom • Eljárás C-15003 P-3 antibiotikum előállítására
9 182267 10 4. táblázat folytatása C—15 003 P—3 antibiotikum C32H43C1N209 = = 635,169 Infravörös elnyelési 1740, 1730, 1670, 1580, spektrum (cm'J) 1445, 1385, 1340, 1255, KBr 1180, 1150, 1100, 1080 Mágneses magrezonan-1,27 (duplett) (3H), cia spektrum (ppm) 100 MHz CDClj-ban 1,28 (duplett) (3H) Tömegspektrum (m/e) 573, 485, 470, 450 Oldhatóság Oldhatatlan petroléterben, n-hexánban, vízben ; korlátoltan oldódik benzolban, éterben ; oldódik kloroformban, etil-acetátban, acetonban, etanolban, metanolban, piridinben, tetrahidrofuránban, dimetil-szulfoxidban. Színreakciók D ragen dór ff : pozitív, Beilstein: pozitív. A jelen szabadalmi leírás szerinti eljárásban a P-3 aránya a C-15003-ban igen magas. Mivel a jelen eljárás olyan előnyös tulajdonságokkal rendelkezik, hogy a kívánt termék termelési szintje magas, a kívánt termék kinyerése és tisztítása egyszerű, és a nyersanyag olcsó és folyadék halmazállapotú, valamint jelen eljárás nem okoz olyan hibákat, mint az izo-vajsav rossz szaga, valamint a készülék tönkremenetele. A jelen találmánynak megvan az az előnye is, hogy az izobutil-alkohol és az izobutil-aldehid toxicitása alacsony a C-15003 antibiotikumot termelő törzsre. Ennélfogva a jelen eljárás előnyös a P-3 antibiotikum előállítására ipari úton. A C-15003 P-3 antibiotikum biológiai aktivitását és használatát a 4.162.940. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás tartalmazza. Azaz a P-3 aktivitása a következő : A) Antimikrobiális aktivitás: Trypticase Soy Agart (Baltimore Biological Laboratories, USA terméke) használva vizsgáló táptalajként, az alábbiakban leírt mikroorganizmusokkal szembeni gátló koncentrációt a papírkorong módszerrel határoztuk meg. Mindegyik papírkorongot (Toyo Seisakusho, vékony típusú, 8 mm átmérőjű) 0,02 ml 300 ug/ml koncentrációjú C-15003 P-3 oldattal itatjuk át, és az alábbiakban ismertetett mikroorganizmusokkal beoltott agarlemezekre helyezzük. A C-15003 P-3 antibiotikumnak nincs hatása a következő baktériumok ellen: Escherichia coli, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens és Mycobacterium avium. Másrészt azonban a Talaromyces avellanus nevű gomba növekedését a C-15003 P-3 antibiotikum gátolja a következő összetételű agarlemezen : 3,5 g dinátrium-hidrogén-foszfát, 0,5 g kálium-dihidrogén-foszfát, 5 g élesztőkivonat (Difco), 10 g glükóz, 15 g agar, 1000 ml desztillált vízben (pH=7,0). A C-15003 P-3 minimális gátló koncentrációja 3 f/g/ml. Továbbá a Tetrahymena pyriformis W vizsgáló organizmust a következő összetételű vizsgáló táptalajon tenyésztjük : 20 g Proteose-Peptone (Difco), 1 g élesztőkivonat, 2 g glükóz, 1000 ml desztillált vízben és 10 ml foszfát-puifer pH=7,0 (1M); a következő körülmények között: 28 °C, 44—48 óra tenyésztési idő; a C-15003 P-3 növekedésgátló hatását az egysejtű ellen sorozathígitási módszerrel határozzuk meg. A növekedésgátlás 1 [zg/ml-nél jelentkezik. B) Daganatgátló hatás : A C-15003 P-3 terápiás hatását (9 egymást követő nap adagolva intraperitoneálisan) egerekben, P388 leukémia sejtekre (1 xlO'’ sejt) állat, egér, intraperitoneális beültetés) vizsgáljuk. A C-15003 P-3 antibiotikum daganatellenes hatása 200%-os élettartam-meghosszabbító hatású 0,006 25 mg/kg/nap dózisszinten. C) Toxicitás : Az előzetes akut toxicitási vizsgálatok során egeret alkalmazva vizsgálandó állatként, a C-15003 P-3 antibiotikumot intraperitoneálisan injektálva, az anyag LD100 értéke 0,625 mg/kg, az LD0 érték 0,313 mg/kg. Mint azt az előzőekben említettük, a C-15003 P-3 antibiotikumnak erős gátló hatása van gombák és egysejtűek ellen, ezért értékes gomba- és egysejtű-ellenes anyag. Továbbá, mivel a C-15003 P-3 antibiotikum daga aatos emlősállatoknál (például egér) élettartam-hoszszabbító hatású, az is elvárható, hogy a vegyület értékes daganatellenes szer lesz. \ P-3 antibiotikumot, gombaellenes és egysejtű-ellenes szer lévén, előnyösen használhatjuk reagensként bakteriális ökológiai meghatározásoknál talajban, aktív iszapban, állati testfolyadékban és hasonlókban. így, ha ériékes baktériumokat akarunk izolálni talajmintákból, vagy, ha szennyvízkezelésre használt aktív iszap-rendszer működésével és analízisével kapcsolatban azt akarjuk, hogy a baktériumok a gombáktól és egysejtűektől függetlenül fejtsék ki hatásukat, akkor a találmány szerinti antibiotikumot használhatjuk a baktérium-flóra szelektív növekedésének elősegítésére anélkül, hogy a m ntában jelenlévő gombák és egysejtűek növekedését megengednénk. Egy tipikus példa szerint a mintát folyadék vagy szilárd táptalajhoz adjuk, majd a P-3 antibiotikum 1% metanol-vizes oldatban lévő 10 vagy 100 u.g/ml koncentrációjú oldatát adjuk a táptalajba, melyet azután inkubálunk. Amint az a 4.162.940. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban szerepel, a P-3' antibiotikumnak gombaellenes hatása van. A gombaellenes hatást az 5. táblázatban mutatjuk be. Amint az az 5. táblázatból látható, 'a P-3 antibiotikum növényi betegségeket okozó mikroorganizmusok növekedését is gátolja. A papírkorongokat 0,02 ml 1000 p.g/ml koncentrációjú P-3 oldattal impregnáljuk, majd az 5. táblázat szerint mikroorganizmusokkal megfelelően beoltott lemezekre helyezzük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
