182267. lajstromszámú szabadalom • Eljárás C-15003 P-3 antibiotikum előállítására
182267 3 Actinomyces törzset (Nocardia sp. No. C-15003; „C-15003 sz. törzs”-ként rövidítve), melyet talajból vagy egyéb forrásból izoláltak. A szabadalmi leírásban szereplő C-15003 sz. törzset letétbe helyezték a Fermentációs Kutató Intézetnél, Ipari Tudomány és Technológia Ügynökség (FERM), Japánban a 3992 FERM-P szám alatt 1977. március 23-án; a Fermentációs Intézetnél Osakában (IFO), Japánban a 13726 IFO szám alatt 1977. március 22-én és az Amerikai Nemzeti Törzsgyűjteményben (ATCC), Marylandban az Amerikai Egyesült Államokban az ATCC 31281 szám alatt 1977. március 31-én. A C-15003 számú Nocardia sp. (ATCC 31281) az Amerikai Nemzeti Törzsgyűjtemény Törzsei Katalógusának I. kötetében szerepel leírva a 14. kiadásban (1980). A C-15003 számú törzs mikrobiológiai tulajdonságainak leírását a 4.162.940. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás tartalmazza. A C-15003 számú törzs mikrobiológiai tulajdonságainak vizsgálatát a Schirling és Gottlieb által leírt eljárások analógiájára végeztük (International Journal of Systematic Bacteriology, 16, 313, 1966). 28 °C-on 21 napig végzett tenyésztés során a következőket figyeltük meg : 1. Morfológiai jellemzők : A vegetatív micélium jól nő, elágazó mind agar felületen, mind folyadék táptalajban. A hifa-fonalak zöme 0,8—1,2 um átmérőjű és néhány esetben töredezik; ekkor baktérium-pálcákra vagy rövid, elágazó hifa-fonalakra hasonlít. A törzs jól nő a különböző táptalajokon, a légmicélium ránő a vegetatív micéliumra, habár gyakran képez coremia-szerű testeket (50—20x200x1000 |xm), melyeken további légmicélium-növekedés folyik. A légmicéliumok zöme kacskaringós, egyenes, vagy néhány esetben találhatunk enyhén spirális formát is. Az idős tenyészetek mikroszkópos vizsgálata során kiderült, hogy csak néhány esetben találhatók spóratartószerű sejtek a láncokban, míg az ilyen idős tenyészetek felületéről nyert sejt-szuszpenziók a mikroszkópos vizsgálatok szerint sok hosszúkás ellipszis (0,8—1,2 fxmx x4,8—6,3 u.m) és ellipszis (0,8—1,2 x 1,0—2,0 ixm) formájú testeket tartalmaznak, melyek arthospórákra hasonlítanak. Az elektron-mikroszkópos vizsgálatok szerint ezeknek a testeknek sima a felületük. 2. A sejtek alkotóelemei: A törzset rázott lombikban tenyésztettük módosított ISP 1. sz. táptalajban 28 'C-on, 66—90 órán keresztül, ezután a sejteket összegyűjtöttük és mostuk. Becker és munkatársai (Applied Microbiology, 12, 421, 1964), valamint M. P. Lechevalier (Journal of Laboratory and Clinical Medicine, 71, 934, 1968) módszerével az összes sejtet vizsgáltuk diamino-pimelinsavra és cukor-összetételre. Az előbbit mező formában találtuk, míg galaktóznak és arabinóznak megfelelő foltokat detektáltunk a cukorvizsgálat során. 3. A táptalajokon megfigyelhető jellemzők : A törzs viszonylag jól nőtt a különböző táptalajokon, a vegetatív micélium a tenyésztés korai fázisában színtelen vagy halványsárga, a későbbi fázisokban világossárga, sárgásbarnától sárgáig, és sárgásbarna. A törzs a különböző táptalajokon sárga és sárga-sárgásbarna színű pigmentet termel. A légmicélium porszerű, és általában közepesen nő, színe fehér-sárga vagy sárga- 5 sárgásbarna. A törzs különböző táptalajokon megfigyelhető jellemzőit az 1. táblázatban láthatjuk. A C-15003 számú törzs tenyésztési jellemzői különböző táptalajokon 15 A) Szacharóz-nitrát-agar : Növekedés (N): közepes, Brite dinnyesárga (3 ia)* színtől sárgásbarnáig (3 ic)*, coremia-szerű testeket képez. Légmicélium (LM) : gyér, kevés. 20 Oldható színanyag (OP) : nincs, vagy halvány sárgásbarna. B) Glicerin-nitrát-agar : N: közepes, fényes elefántcsontszínű (2 ca)*, coremia-szerű testeket képez. 25 LM : közepes, fehér. OP: nincs. C) Glükóz-aszparagin-agar: N : közepes, Brite mocsári gólyahír (sárga) (3 paptól Brite sárgáig (2 pa)*. 30 LM : gyér, fehér. OP: Brite sárga (2 pa)*. DJ Glicerin-aszparagin-agar : N : közepes, fényes elefántcsontszínű (2 ca)*, coremia-szerű testeket képez. 35 LM: gyér, fehér. OP: nincs. EJ Keményítő-agar: N: közepes, fényes elefántcsontszíntől (2 ca)*, fényes búzasárgáig (2 ea)*, coremia-szerű testeket ké- 40 pez. LM: bőséges, fényes elefántcsontszínű (2 ca)*. OP: nincs. F) Tápagar: N : közepes, fényes elefántcsont-színtől (2 ca)* kolo- 45 niálsárgáig (2 ga)*, coremia-szerű testeket képez. LM: gyér, fehér. OP: nincs. G) Kalcium-malát-agar : N : közepes, fényes elefántcsontszínű (2 ca)*-től fé- 50 nyes búzasárgáig (2 ea)*, coremia-szerű testeket képez. LM: közepes, fehértől fényes elefántcsontszínig (2 ca)*. OP: nincs. 55 H) Élesztőkivonat-malátakivonat-agar: N : közepes, borostyánsárgától (3 le)* Brite sárgáig (3 la)*, coremia-szerű testeket képez. LM: közepes, fehértől fényes elefántcsontszínig (2 ca)*. 60 OP: nincs. I) Zabliszt-agar: N : közepes, fényes elefántcsontszíntől (2 ca)* koloniálsárgáig (2 ga)* coremia-szerű testeket képez. LM : gyér, fehértől világossárgáig. 65 OP: nincs. 2
