182224. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antidepresszív, cisz-4-fenil-1,2,3,4-tetrahidro-1-naftil-amin-származékok előállítására
23 1.32224 24 egérnek szubkután 2 mg/kg testsúly reszerpint fecskendezünk be és az állatokat 18 órán át 20 °C-on tartjuk. Ezután megmérjük az egerek végbélhőmérsékletét és a próba elvégzéséhez ötös csoportokba osztjuk őket. A csoportoknak orálisan vagy fiziológiás konyhasóoldatot adunk (kontrollok), vagy a megnevezett vegyületet (10 mg per kg testsúly) és 2 óra múlva megmérjük végbél-hőmérsékletüket. A vizsgálandó vegyülettel kezelt 5 egér átlagos végbél-hőmérséklete (±S.D.) 20,3 ±0,3 °C, összehasonlítva a kontroll csoport 20 egerének 20,4 + 1,2 °C átlagos hőmérsékletével. Ezen észlelés összhangban áll egyéb irodalmi adatokkal, melyek szerint a reszerpin-hipotermia ellensúlyozása a noradrenalin-felvétel gátlásával, nem pedig a szerotoninfelvétel gátlásával függ össze. 69. példa Cisz-(lS)-N-metil-4-(3,4-diklór-fenil)-l,2,3,4-tetrahidro-l-naftil-amin-hidroklorid antagonizáló képessége patkányagy p-klór-amfetaminnal (PCA) inkubált szerotonin-kiürülésére in vivo A szerotonin-felvételt gátló anyagok dózisfüggő módon antagonizálják a PCA szerotonin-kiürítő aktivitását, mely utóbbi vegyület hatásának kifejtéséhez az szükséges, hogy az idegsejtek 5HT-t vegyenek fel. Sprague-Dawley CD hím patkányok (180—220 g, Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, Mass.) ötös csoportjait két, egyidejűleg adott injekciót kapnak : a megnevezett teszt-vegyületet (különböző dózisszinteken)+6,6 mg/kg testsúly PCA-t, vagy pedig vizet-' vizet (kontrollok). A patkányok fejét 4 óra múlva levágjuk és egész agyukban meghatározzuk a szerotonintartalmat Bogdanski módszerével. Az agyszövetet 0,ln sósavoldattal homogenizáljuk, a homogenizátumot borátpufferrel meglúgosítjuk és butanollal extraháljuk. A vizes kivonatokat tömény sósavoldattal megsavanyítjuk és a szerotonin saját fluoreszcenciáját spektrofotofluorométerben megmérjük. Az EDJ0 érték, azaz a PCA- indukált szerotonin-kiürülés 50%-os helyreállását előidéző dózis szemilogaritmusos papíron való grafikus értékelés alapján 0,2 mg/kg testsúly. 70. példa A „magatartásbeli kétségbeesés” in vivo csökkenése (módosított Porsolt-módszer) cisz-(lS)-N-metil-4- -3,4-diklór-fenil)-l,2,3,4-tetrahidro-l-naftil-amin-hidroklorid hatására A Porsolt és munkatársai által [Arch. Int. Pharmacodyn. 229, 327 —336 (1977)] leírt eljárás módosítását alkalmazzuk. 25—30 g-os Swiss—Webster CD hím egereket (Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, Mass.) standard laboratóriumi körülmények között tartunk legalább 1 hétig a kísérlet előtt. 10 egérből álló csoportoknak szubkután a megnevezett vegyület adott dózisát, vagy pedig hordozóanyagot [5% Emulphor/5% etanol/90% fiziológiás sóoldat] fecskendezünk be. 1 óra múlva az egereket egyenként 25 °C-os vizet tartalmazó 1 literes főzőpohárba helyezzük (a víz magassága 7 cm). A bemerülés után 2 perc múlva elkezdjük az egerek 30 másodpercenkénti megfigyelését a mozdulatlanságot illetően. Összesen 10 megfigyelést végzünk és a következő értékelést alkalmazzuk : „0=mozgó, úszó, menekülést megkísérlő egér”, vagy „l = mozdulatlan egér”. Mindegyik egérnél összeadjuk a pozitív megfigyelések számát és kiszámítjuk a 10 csoport átlagos mozdulatlansági pontszámát. Dózis/hatás analízis céljából ezeket az adatokat %-os MPE („maximum possible effect") értékekké alakítjuk át, a következő egyenlet szerint : kontroll átlag—teszt átlag °/„ MPE=-----------------------------------— xlOO kontroll átlag A következő % MPE értékeket kapjuk a megnevezett vegyület különböző dózisaira : Dózis (mg/kg) % MPE 0,10 7,9 0,32 24 1,00 17 3,20 41 10,0 57 17,8 57 32,0 66 A fenti adatokból MPEJ0 értéket, azaz a kontrolihoz képest 50%-os mozdulatlanság-csökkenést előidéző dózist határozunk meg lineáris regresszió analízissel ; ez az érték a vizsgált vegyületre 7,6 mg/kg testsúly. 71—77. példa A 70. példában leírtak szerint az alább felsorolt vegyületekre in vivo meghatározzuk a „magatartásbeli kétségbeesés” csökkenését: Példa Vegyület előállítási MPE50 (mg/kg) száma példa száma 71. í. 4,5 72. 3. 19 73. 7. 138 74. 11. 42a 75. 18. >32 76. 22. b 77. Összehasonlító vegyület c d Jelmagyarázat : a %MPE 45-ről 10-re csökken, ha 32,0 mg/kg dózis helyett 56,0 mg/kg dózist alkalmazunk, ami nyilvánvaló túldozírozást tükröz. A %MPE adatokat 32,0 mg/kg dózis felett nem használjuk fel az MPE50 kiszámításához. b Nem figyeltünk meg mozdulatlanságra gyakorolt hatást (a kontrolihoz viszonyítva) 56,0 mg/kg dózisnál. c Cisz-(IS) (lR)-N-metil-4-feniI-l,2,3,4-tetrahidro-l-naftil-amin-hidroklorid (4 029 731. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás). d Nem figyeltünk meg mozdulatlanságra gyakorolt hatást (a kontrolihoz viszonyítva) 32,0 mg/kg dózisnál. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
