182144. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipikoleszrterémiás hatású vegyületek előállítására fermentációs úton
182.144 B. Extrahálás Waring-tipu.au keverőben 10,2 liter 6,0 jpH-çu teljes tenyészetet keverésnek vetünk alá a nagyobb miceliális rögök felapritása céljából, majd a tenyészetet centrifugáljuk és a tiszta felüluszó folyadékfázist dekantáljuk. Szűrés után a szürietből 10 litert 3 liter etil-acetáttal extrahálunk, 1820 ml tiszta extraktumot kapva. További 3 liter etil-acetáttal végzett második extrahálás 3350 ml tiszta extraktumot ad. A dekantálásnál kapott sejttömeget is extrahálásnak vetjük alá úgy, hogy 2 liter metanollal 1 órán át keverjük, majd szűrjük, 2100 ml szűrletet kapva. Ezeknek az' extraktumoknak az aliquotjait ezután szárítást követően az 1. példa C. részében ismertetett módon vizsgálatnak vetjük alá, a következő eredményeket kapva: Térfogat /ml/ Extraktumok vizsgálata összes szárazanyag- Teljes aktivitás tartalom /mg/ egységekben 1820 3550 2100 1133 787 13,15 1 4-96 695 314- 900 1 144- 067 C. Gélszürés A példa B. részében kapott első két szürletből összesen elkülöníthető szárazanyagot összekeverjük egymással, majd a kapott keveréket metanolban oldjuk és az igy kapott oldatot szűrjük az oldhatatlan rész eltávolítása céljából. A 30 ml-nyi szür- Xetet ezután felvlsszüfc Sephadex LH-20 gyantával töltött gélszürési oszlopra /2,5 cm . 200 cm. 930 ml/, majd molekulasúly szerint frakciónáljuk eluálószerként metanolt használva. Vezérfonalként a törésmutató értékét, illetve az ibolyántúli spektrumot használva a legjobb frakciókat kiválasztjuk, majd bioelemzésnek vetjük alá, a következő eredményeket kapva: 1. frakció 2. frakció 3- frakció összes szárazanyagtartalom /mg/ 89 278 779 Teljes aktivitás egységekben 106 271 1 099 680 210 357 D. Szeparálás és tisztitás Az előzőekben ismertetett módon kapott 2. frakcióból vett mintát előzetes szűrésnek vetünk alá Waters Bondapak C18/Porasil B gyantából készült 1 grammos ágyon, majd ötszörös térfogatmenynyiségü metanollal eluálást végzünk. A metanolos eluátumot 0,5 ml térfogatra koncentráljuk, majd a koncentrátumot Waters /iCÍ8 gyantával töltött, 3,9 tóm . 30 cm méretű oszlopon többszörös krómatografálásnak vetjük alá, eluálószerként metanol és 2^3-es pH-ju 0,05 mólos ammónium-foszfát-oldat 75 ' 25 térfogatarányú elegyét használva. A kapott frakciókat Beckman-spekt'rofotométerrel. értékeljük, majd a 236 nm-nél maximumot, illetve 229 és 24-5 nm-nél vállakat mutató frakciókat összeöntjük és csökkentett nyomáson vizes oldattá betöményitjük. Az igy kapott koncentrátum pH-ját 2 mólos kálium-hidroxid-oldattál 6,5-re beállítjuk, 9
