182144. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipikoleszrterémiás hatású vegyületek előállítására fermentációs úton
18Z144 lackba öntjük, majd 150 ml XAD-2 gyantát adunk hozzá. Előre be4 állított menetrend szerint működő automatikus extraktort használva az Így kapott keveréket 2 órán át keverjük. Az elhasznált tenyészetet ezután leszivatjuk, majd kiöntjük. A gyantát 200- 200 ml ionmentes vízzel kétszer mossuk, a mosófolyadékokat elöntve. Ezután a gyantához izopropanol, etil-acetát és diklórmetán 25 : 45 í 50 térfogatarányu elegyéből 300 ml-t adunk, majd az Így kapott keveréket 2 órán át keverjük. A keveréket ezután egy Büchner-töles éren vagy szintereit üvegtölcséren szüljük, a gyantát pedig elhajítjuk. A teljes tenyészetből koráb-., ban kiszúrt szilárd részt 100 ml acetonnal 0,5 órán át keverjük, majd a keveréket centrifugáljuk és a felülúszó folyadékfázist ; dekantáljuk. A korábban kapott s zűriét et a dekantátummal egyesitjük, majd 15 ml térfogatra betöményitjük. C. Az I. képletü vegyület biológiai hatásának vizsgálata A szürletet Bég, Stonik és Brewer módszerével fFEBS Letters, 80, 123-129 /1977/J vizsgáljuk Kleinsek, Bahgatham és •_ Porter môïïszerével £Proc. Nat. Acad. Sei.. 74. 1431-1^35 /1977fj előállított-enzimeket használva annak megalTapitása céljából, hogy a MG—CoA reduktáz enzim inhibitoraként hat-e. A pozitív - eredmény [90 %-nál nagyobb gátlás 20 mikrogramm/ml koncentrációban, ami 2,3 mikrogramm/ml. ICTM értéknek felel meg] jelzi a szterln-szintézis rendkívül hatásos inhibitorának jelenlétét, amely a MG-CoA reduktáz enzimre hat. 2. példa Az I és a III képletü vegyület előállítása A. Fermentálás Liofllizált Aspergillus MF-4833-tenyeszetet tartalmazó kémcsövet aszeptikus körülmények között kinyitunk, majd a kémcső tartalmát nem bordázott 250 ml-es Erlenmeyer-Íombíkban /a továbbiakban 1. számú oltólombiknak fogjuk hivni/ 40 ml 0.tápközegben szuszpendáljuk. C. tápközeg összetétele: kukoricalekvár paradicsompüré zabliszt glükóz j2. számú nyomelemkeverék ■jdesztillált viz pH 6,8 értékre beállítva 40 g- .......10 g 10 g 10 g 1000 ml nátrium-hidroxiddal A beoltott 1. számú oltólombikot 24 órán át 28°C-on in~ kubáljuk 220 fordulat/perc sebességű rázógépen /50,8 mm-es fél** löket/. Az 1. számú oltólombikban igy képződött tenyészetből 2-2 ml-rel ezután nyolc további nem bordázott 250 ml-es Erlenmeyer-lombikban /ezeket a továbbiakban 2. számú oltólombikoknak fogjuk hivni/ 40 - 40 ml C. tápközeget beoltunk, majd a nyolc darab 2. számú oltólombikot ugyanúgy inkubáljuk, mint az 1. számú oltólombikot. A nyolc 2. számú oltólombikban kapott tenyészeteket az lnkubálás befejeztével összeöntjük, majd a kapott keverékből 14-14 ml-rel beoltunk húsz nem bordázott, két literes ferlenmeyer-lombikban 500 - 500 ml B. tápközeget. Ezt a húsz lomjbikot ezután keverés nélkül 28°C-on 11 napon át inkubáljuk, ma^jd Ibz lnkubálás befejezését követően tartalmukat összeöntjük. 8
