182144. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipikoleszrterémiás hatású vegyületek előállítására fermentációs úton
182.144 0,29 g mennyiségben barnás szinü csapadékot kapva maradékként. Az utóbbiból 215 mg-ot felveszünk metilén-klorid és metil-cianid 65 : 35 térfogatarányu elegyéből 1,5 ml-ben, majd az igy kapott oldatot felvisszük előre megtöltött és ekvilíbrált szili kag él- ősz lop /EM LOBAR Size B/ tetejére és az oszlopot 5 ml/ perc eluálási sebesség mellett az előbb említett oldószerelegygyel eluáljuk. Az eluátum 255* és 360. ml-e között jelentkező csúcsnak megfelelő frakció lepárlásakor 121 mg kristályos termék marad vissza, amelynek olvadáspontja 155 - 160°C. Ennek az anyagnak EM RP 18 fordított fázisú analitikai oszlopon /S. Merck cég HIBAR II nevű, 906046 katalógusazámu terméke/ 0,05 mólos 3,0 pH-ju nátrium-foszfát-oldat es acetonitril 45 55 térfogatarányú elegyével mint eluálószerrel 2 ml/perc eluálási sebesség mellett végzett nagynyomású folyadékkromatografálásakor a 11. percnél jellegzetes ibolyántúli abszorpciós csúcs észlelhető. Ebből az anyagból 82 mg-ot először 0.6 ml, majd 0,4 ml abszolút etanolból átkristályositunk, exszikkator ban foszfor-pentoxid fölött egy éjszakán át végzett szárítást követően 40 mg mennyiségben fehér pelyhes kristályokat kapva. E terméknek az előbb emlitett rendszerrel végzett analitikai nagynyomású folyadékká ómat ograf álásakor egyetlen éles csúcs észlelhető 11 perces eluálási időnél. További átkristályositások után az olvadáspont 170 - 171°C-ra növelhető. A termék spektruma alapján az I képletü vegyületként azonositható. Ez az anyag az 1. példában ismertetett invitro HMG-CoA reduktáz vizsgálatban 0,01 mikrogramm/ml nagyságú Icáért éket mutat. ■ 7. példa A III képletü vegyület ammoniums ójának közvetlen elkülönitése A későbbiekben ismertetésre kerülő 15. példa A. része szerint végrehajtott fermentálás eredményeképpen kapott tenyészetet /mintegy 380 liter/ 5-ös pH-ra savanyítjuk foszforsavval, majd 266 liter etil-acetátot adunk hozzá és az igy kapott keveréket intenzív keverésnek vetjük alá. Ezután a micélium-maradékot szűréssel eltávolítjuk, a szürőlepényt pedig kis mennyiségű etil-acefcáttal mossuk és a mosófolyadekot a szürlethez hozzáadjuk. A kapott elegyből a szerves fázist elválasztjuk, majd összekeverjük 19 liter 0,2 n nátrium-hidroxid-oldattal. Az igy kapott keveréket intenziven keverjük, majd ülepedni hagyjuk. A vizes fázist ezután elválasztjuk, majd pH-ját 9-*ől 5-*e beállítjuk foszforsav adagolása utján. Ezután extrahálásnak vetjük alá, először hexán és öMl-acetát 2: 1 tér fogat arányú elegy éből 7,6 literrel, majd ugyanebből az oldószerelegyből 3,8 literrel# A kapott extraktumokat7 ösazeöntjük. majd vízmentes magnéziumszulfát fölött szárit juk. ' .A száritoszert ezután kiszűrjük, a szürőlepényt az emlitett oldószerelegyből 1 literrel mosva és a mosófolyadékot a szürlethez hozzáadva. Az igy kapott elegyét ezután 2 liter acetonnal hígítjuk, majd keveres közben ammóniagázt vezetünk bele. A gáz abslzorbeálódik és kristályos csapadék jelenik meg. Amikor már az ammónia'nem abszorbeálódík és a kivált csapadék színe sötétedni kezd, akkor az ammónia bevezetését megszüntetjük és a reakcióe.legyet néhány órán át állni hagyjuk, majd szűrjük. A nyers ammóílumsót tartalmazó szürőlepényt 14
