182067. lajstromszámú szabadalom • Eljárás LH-RH és LH-RH analógok előállítására
182.067 L- ' Glu-Ilia /Dnp/-0H képletü vegyülelet és egy II-L-Tr p-L-o er-L-Ty r-G^Ly-L-Le u-L-A r g-L -rxo-JJy-Iffl2 képleüü vegyületet használunk, ahol a 6-helyzetü Gly és a 10- helyzetü Gly-HHp a tárgyi körben megadott módon szubsztituálva lehot, és az^olaalláncbeli karboxil-csoportok a peptIdkémiában szokásos védőcsoportokkal védve vannak, majd a kapott reakciótermékből a dinitro-fenil-csoportot hi.drazinolizissel vagy tio~ lizissel lehasitjuk. A találmány szerinti eljárással előállított LH-RH-analó^ gokban a 6-helyzetü Gly csoport helyettesítve lehet bármely olyan természetes vagy szintetikus, oldal-láncban szabad Uarboxil- vagy aminocsoportot nem tartalmazó D-aminosavval, amely az LH-RII-analóg biológiai hatékonyságát nem csökkenti /lásd Schally és munkatársai: Science 1/2, 341 /1973/* A 6-helyzetü Gly csoport előnyös helyettes it őTt a D-Ser /BuV, D-leu, D-Ala, D-Phe, D-Trp, D-Glu/oiklohexil/, I)-G1ü/0BuV és D-Lys/Boc/ csoportok képviselik. A találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagként felhasználásra kerülő ;-01u~His/Dnp/-OH uj dipeptid-származékot a pept idkémiában szokásos módszerekkel, például a -Glu-IIis-OH dipeptid 2,4-dinitro-fluor-benzollal, víztartalmú, nátrium-hidrogén-karbonáttal pufferezett oldatban történő reagáltatása utján állíthatjuk elő. A találmány szerinti eljárásban oldószerként - a reagáló anyagok jó oldódása érdekében - poláros oldószerek, például dime ti 1-acet amid, dimetil-fornamid, dimetil-szulfoxid, .foszforsav-trisz-/dimetil-amid/ vagy N-metil-pirrolidon alkalmazható előnyösen. A szintézist -10 °C és a szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten folytathatjuk le. Előnyösen 0°C körüli hőmérsékleten kezdjük a reakciót es később szobahőmérsékletre hagyjuk a reakcióelegyet felmelegedni. Kondenzálószerként előnyösen a könnyen hozzáférhető diciklóhexil-karbodiimidet /DCC/ alkalmazzuk, felhasználhatók azonban erre a célra más karbodiimidek, például 1-ciklohexil- 3-/2-morfolino-etil/-karbodiimid-toluolszulfonát vég y 1-etil-$“/3“dimetilamino-propil/-karbodi imid-hidroklorid is. Közbenső termékként először oly peptideket kapunk, amelyek a hi3ztidin imidazol-gyürüjén dinitro-fenil-csoporttal vannak védve. Ezt a dinitro-fenil-csoportot azután a tiolizissel /Biochem-Biophys. Rés. Commun. 2j), 178 /1967/; Biochemistry j}, 5122 /1970/ vagy a hidrazinolizissel /Tetrahedron Letters 44, 4121 /I971/ hasítjuk le. ~ A Dnp-tartalmu közbenső terméket általában nem szükséges az előállítási reakcióelegyből elkülöníteni. A peptid-kapcsolás után a reakcióelegyhez például valamely tiolt, mint merkapto-etanolt vagy etil-merkaptánt, illetőleg hidrazint adunk és a Dnp-csoport lehasitásának befejeződése után - ami vékonyrétegkor ómat ográf iával könnyen ellenőrizhető - a reakcióelegyet a szokásos módon feldolgozzuk. Ha védőcsoport-lehasitó reagensként hidrazint alkalmazunk, akkor dimetil-formamid nem alkalmas oliószerként, mert ez a vegyület hidrazinnal szemben nem stabil. 3
