182005. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens alfa-amiláz meghatározására
182.005 Egy másik előnyös rendszer a hasadási termékek meghatárol zására a maltóz-foszforiláz-rendszer, amely lényegében maltóz-íoazforilázból, A-foszfo~glükomutázból /flPMG/. giükóz-6-foszfát-dehidrogenázbol /G6PDH/, glükóz-l,6-dlfosziátbói /G1,6DP/, NAD-ból, pufferból, maltoheptaózból és adott esetben 6-foszfo-glükonat-dehidrogenázból /6PGDH/ áll* Egy ezen a meghatározási rendszeren alapuló különösen előnyös reagens,az alábbiakból állj 0,5 x ICr - 20 x ICr egyaég/1 maltóz-foszforlláz, 1 x 3.02 - 1 x 104 egység/l A-födzíó-glükomutáz //J-pgium/, 2 x 102 - 5 x 104 egység/1 glükóz-6-foszfát-dehidrogenáz*, 0,5 - 10 mmól/1 NAD, 0,001 - 1 mmól/1 glükóz-l,6-dlfoszfát, ~ J if er. x x xu - x - xu egyseg/x o-ioszio-glükonát-dehidrogenáe. A találmány szerinti reagens lehet száraz vagy oldott formában, lehet valamilyen lapformáju hordozón, például valamilyen fólián, szlvókénes papíron vagy hasonlón, amely impregnálva van vele. Az utóbbi esetben ez oélszerüen legalább három rétegből áll, ahol az első réteg a szubsztrátot tartalmazza, a második réteg záróréteg, és a harmadik réteg tartalmazza a hasítási termékek meghatározására szolgáló rendszert. Ha egy ilyen többrétegű reagensanyagot, amely o(-amiláz egyszerű gyorsvizsfálatának kivitelezésére szolgálj egy c?(-amilázt tartalmazó ío~ yékony mintával hozzuk érintkezésbe, úgy az cvamlláz hasítja a szubsztrátot, és a töredékek átdiffundálnak a közbülső rétegen a harmadik, a mérŐrendszert tartalmazó rétegbe. Kimutatási reakcióként ebben az esetben célszerűen valamilyen szinképző reakciót alkalmazunk, hogy az (^-amiláz koncentrációját a fellépő elszíneződéssel láthatóvá tegyük, mivel a hasitási termékek maguk már nem színesek. A találmány szerint alkalmazott maltoheptaóz-származékok, különböző módszerekekkel állíthatók elő. A fenilezett származék esetében mind kémiai mind enzimetikus módszerek alkalmazhatók.' A kémiai szintézis a peracetilezett maltoheptaóz és fenol Prledel-Orafts katalizátor jelenlétében végzett reagáltatásán alapszik, az enzimatlkua módszer esetén a megfelelő fenil-glükozidot mikrobiális transzferáz jelenlétében transzglükozllez-* zük. Az B helyén szorbit- vagy glükonsavcsoportot tartalmazó I általános képletü vegyületeket maltoheptaóz redukálásával vagy oxidáláaával állíthatjuk elő. Ezeket az eljárásokat magyal szabadalmi bejelöntésünkben Írjuk le részletesen. Amint mar említettük* a találmány által nemcsak egy gyors és specifikus eljárást nyerünk az p(-amiláz kimutatására, hanem különösen a lag-rázlst kerüljük el egészen vagy messzemenően, ami különösen jelentős az eljárás analizáló automatákra való alkalmazásakor. Azonkívül a találmány szerinti eljárás sok ki-' vitel! formájában a kiértékelésre szolgáló komplikált berendezések nélkül kivitelezhető, és ezért különösen gyorsdlagnoaztikumokhoz es látható tartományban történő optikai meghatározásra megfelelő. Egyidejűleg a találmány szerinti eljárás különböző kiviteli formái még ultraibolya-mérőkészülékekkel is mérhetők. További előny a szigorú arányosság, és az, hogy a esetben 7
