182005. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens alfa-amiláz meghatározására
182.005 vér kémiailag rokon tartalmi anyagai semmilyen zavart nem okoz* nak. A találmány szerint alkalmazott szubsztrátok jól és nagy tisztás ágban hozzáférhetők. A maltoheptaóz egy egyszerű előállítását a 27 41 191. 2 sz. német szövetségi köztársasági szabadalmi leírásban közlik. Az eljárás megfelelő az o(-amiláz bio-f lógial folyadékokban, igy szérumban, hepar inplazmában, vizelet-*« ben és hasonlókban? vagy más folyékony vagy szilárd anyagokban' történő meghatároz as ár a. A következő példák szemléltetik a találmányt. 1. példa Maltogén módszer /C^-glükozidáz-rendszer/. Egy 0^-glükozidázt, glükóz-6-foszfát-dehidrogenázt, hexokinázt, NAD-ot, ATP-t, maltoheptaózt, Mg^+-t, nátrium-kloridot és foszfátpuffért tartalmazó reagenskeveréket oldunk 2,0 ml desztillált vízben. A reagens szobahőmérsékleten körülbelül 1 óráig, +8°0 alatti hőmérsékleten 6 óráig tárolható. A kapott oldatban a reagensek koncentrációja a következői főszfátpuffer, pH 7|0 NaCl Maltoheptaóz ATP NAD hexokináz glükóz-6-fos zfátfdehidr ogenáz O^-glükozidáz 50 mmól/liter, 50 mmól/1, 2 mmól/1, 10 mmól/1, 1,2 mmól/1 2 mmól/1, ^2 egység/1, 2:2 egység/1, ^10 egység/1. Az oldatot 25°C-on 0,02 ml szérummintával elegyítjük, egy 1 cm rétegvastagságú küvettába töltjük, és utána megmérjük az extinkciót egy fotométeren Hg 365 nm-nel. 34-0 nm-nél vagy Hg 334- nm-nél. Íz extinkciót 10 perc elteltével olvassuk le, és utána a leolvasást egyperces időközökben ötször megismételjük. Az igy megállapított percenkénti extinkciókülönbségőkből A számítás a következőképpen történik: egység/liter 25°C * 4244 xAe^cj nm/pero a 2290 xÁEj^q nm/pero a 2335 nm/pero. Az 1. ábra humán szérum fiziológiás konyhasóoldattal való higitási sorozatának eredményeit mutatja, amelyeket ezzel a módszerrel kaptunk. Ha a reagenst két részre osztjuk, amelyek közül az egyikf a maltoheptaózt és a másik az összes többi reagens elegyét tar-talmazza, úgy az ezzel készített oldatok tárolhatósága javithaf tó. A reagensek elegye +8°0 alatti hőmérsékleten 30 órát, azo-' hahóméraókleten körülbelül 8 órát tárolható. A maltoheptaóz óladat eltarthatósága a fenti körülmények között 6 hét illetve körülbelül 1 hét. s
