182005. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens alfa-amiláz meghatározására
182.005 fáttá történő átalakítással. a képződött glükóz-6-foazfát glükóz-6-fossfát-dehidrogenáz jelenlétében HAD-dal ó-foszfo-glüko^ náttá éa NADH-vá történő oxidációjával történik, ahol az utóbbi jképződéae fotometrlásan könnyen követhető, .A mérőjel még tovább erősíthető 6-foszfo-glükonát-dehldrogenáz jelenlétében NAD-dal !ribulózr-5-íoazfáttá éa egy további molekula NADH-vá történő toivább oxidál ás sál. i Ennek a kivitelezési formának az elvét a következő egyenletek szemléltetik; maltoheptaóz + HgÖ maltotrlóz + maltotetraóz mait óz + P O glükóz + /J-glükóz-1- -foszfát ^ A . ° i^-glükóz-l-foazfát^“^0^^^~Sl.íj'K?i|.yi^g^> glükóz-6 -foszfát glükóz-6-foszfát + HAD 6-foszfo-glükonát + NADH + H'r —6-foszfo-glükonát+ NADH r ibulóz-5-foa zfát + NADH + H+ + glükóz-6-foazfát-dehidrogenáz 6-fos - c agaiu&MBM zfo-glükonát-dehidrogenáz^ A találmány ezen kiviteli formájának előnye az. hogy a ,maltóz-foazforiláz specifikusabb, mint az «rglükozidáz, és ezért endogén glükóz nem zavar. A pufíorre vonatkozólag a találmány szerinti elöáráa kiviteli formájára ugyanaz érvényes, mint az p(r-glükozldazoa eljárásra. A találmány szerinti eljárás előbb felsorolt két kiviteli formáján kívül a maltoheptaóz keletkező töredékeinek,^azaz a maltotetraóznak, maltotríóznak és az ezekből képződő maltóznak a meghatározása más eddig Ismert módszerekkel is történhet. A találmány tárgya továbbá niég egy tt-amlláz meghatározására szolgáló reagens, amely egy úf-amiláz-ssubsztrátot és egy az o<-amilaz-szubsztrátból oA-amlláz hatására keletkező hasitási termék meghatározására alkalmas rendszert tartalmas, amelyre aé jellemző, hogy a szubsztrát egy I általános képletü vegyület. I A hasitási termékek meghatározására előnyős rendszer az pC-glükozidáz-rendszer, amely (X-glükoziáázt, alkáli-klór időt és puffert tartalmaz; fia a szubsztrát maga maltoheptaóz, úgy enzimként még hexokináz /HK/ és glükóz-6-foszfát-dehidrogenáz /G6PDH/, valamint NAD, AÏP és magnézium szükséges. EgyCtf-glükozidáz-rends seren alapuló reagens előnyösen a következőkből áll; 5 x IO* - 3 x lo4 egység/1 WÍ-glükozidáz, 105 - 5 x lcA egység/1 hexokináz* 10* - 5 x 10^ egység/1 glükôz-6-foszfát-dehidrogenáz, 0i5““ B mmól/1 NADj---------------------------”-------------------------0,5-5 mmól/1 ATP, 1-3 mmól/1 Mg2+ 25 - 100 mmól/1 N 25 - 200 mmól/1 6 5 - 100 mmól/1 ma Esetleg ennek többszörösét vagy törtrészét tartalmazza száraz vagy oldott formában. aOl vagy KOI, ,2 - 7*o pfi-ju puffer és ltoheptaóz. 5
