181880. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lamatozid C és származékai keverékekből történő kinyerésére illetve dúsítására
7 181880 8 A termék súlya: 1,34 g; összetétele: digoxin: 95%, digitoxin: 1,5%, gitoxin + diginatin: 0,5%. A benzolos extraktumok tartalmazzák a gitoxin-14,16-fenil-bórsavésztert, mely Kieselgel HF254 rétegen (E. Merck, Darmstadt, Német Szövetségi Köztársaság), kloroform-metanol-víz (90 : 10 : 0,25) rendszerben Rf: 0,75 értékkel fut. 4. példa 42% digoxin, 20% 7/3-hidroxi-digoxint, 3% digitoxint, 5% gitoxint + diginatint és 30% ballasztanyagot tartalmazó, a 176,249 számú magyar szabadalmi leírás szerinti fermentációból származó, 1,0 g szekunder glükozidkeveréket 30 ml metanol és 30 ml benzol elegyében oldunk. 100 mg o-nitro-fenilbórsavat, majd keverés mellett 30 ml vizet adunk hozzá. Az alsó, vizes-metanolos fázist elválasztjuk, újabb 100 mg o-nitro-fenilbórsavat adunk a reakciókeverékhez, majd 30 ml benzollal extraháljuk. A fázisok szétválasztása után az alsó fázist újabb 30 ml benzollal extraháljuk. Az alsó fázist elválasztjuk, és a metanolt vákuumban eltávolítjuk. A kivált kristályos anyagot szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. A termék súlya: 380 mg összetétele: 97% digoxin, 1,5% gitoxin + diginatin. Digitoxint, 7/3-hidroxi-digoxint, illetve o-nitro-fenilbórsavas észterét a termék nem tartalmazza. 5. példa 38% lanatozid A-t, 10% lanatozid B-t, 36% lanatozid C-t és 16% ballasztanyagot tartalmazó növényi drogból extrakcióval nyert 500 mg glükozidkeveréket 30 ml benzol és 30 ml metanol elegyében oldunk. 100 mg fenilbórsavat, majd keverés mellett 30 ml vizet adunk hozzá. Az elválasztott vizes-metanolos fázisban újabb 100 mg fenilbórsavat oldunk, és a reakcióelegyet 30 ml benzollal extraháljuk. Az elválasztott alsó fázist újabb 30 ml benzollal extraháljuk. Elválasztás után a metanolt vákuumban eltávolítjuk, a kristályos anyagot szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. A termék súlya: 270 mg. összetétele: lanatozid A: 50%, lanatozid B: 3%, lanatozid C: 47%. 6 6. példa A digoxin frakcionált kristályosítással történő tisztítása során melléktermékként nyert, 17% digitoxint, 41% digoxint, 36% gitoxint és 5% diginatint tartalmazó 10,0 g szekunder glükozidkeverékből (lásd 3. példa) kiindulva a keveréket 150 ml absz. tetrahidrofuránban oldjuk, majd 10 ml etil-ortoacetátot és 250 mg p-toluol-szulfonsavat adunk hozzá. Másfél órás reakcióidő után (szobahőmérséklet, keverés) 5 ml vizet és 250 mg p-toluol-szulfonsavat adunk hozzá, és 16 órán keresztül 4 °C-on tartjuk a reakcióelegyet, majd trietil-aminnal közömbösítjük. Vákuumban szárazra pároljuk, majd a száraz maradék kloroformos oldatát vízzel mossuk. A szárított kloroformos oldatot vákuumban 50ml-re pároljuk, és 24 órán keresztül 4 °C-on kristályosítunk. A kristályos terméket 5 ml kloroformmal, majd 10 ml éterrel mossuk, és 50°C-on vákuumban szárítjuk. A kapott 4,4 g termék összetétele: 15’-acetil-digoxin: 75%, 15’-acetil-digitoxin: 20% és 14-anhidro-15’,16- -diacetil-származékok: 3%. A kloroformos anyalúgot szárazra pároljuk, a maradék az analízis szerint zömében 15’, 16-diace til-14- • anhidrogitoxint és l5’-acetil-digitoxint tartalmaz. Etanolból kristályosítva 2,9 g 15’,16-diacetil-14-anhidrogitoxint izolálunk. Átkristályosítás után az op.: 218-222 °C; [aß5: +149,3° (c=l, metanol); .\EtOH. J99 nm> (e; 19 500). A 4,4 gr acetátkeverék 2,12g-ját ezután Stoll szerint lúgosán hidrolizáljuk [Helv. Chim. Acta, 35, 1318 (1952)]. 212 ml metanolban készült oldatát —5 °C-ra hűtjük, majd keverés és hűtés közben 142 ml 0 °C-os 0,2 n vizes káliumhidroxid-oldatot adagolunk hozzá úgy, hogy a reakcióelegy hőmérséklete 0-5 °C között legyen. Ezután 30 percen keresztül 0 °C-on keverjük, majd vízzel 1 : 1 arányban hígított tömény sósavval közömbösítjük. A közömbösített vizes-metanolos oldatot benzollal extraháljuk, majd a metanol lepárlása után 4 °C-on, 16 órán keresztül kristályosítunk. Szűrve, 50°C-on vákuumban szárítva 1,38 g szekunder glükozidkeveréket izolálunk, melynek összetétele: digoxin: 85%, digitoxin: 13%, 14,16-biszanhidro-származékok: < 1%. A digoxint ezt követően, ismert módon további tisztításnak vethetjük alá. A benzolos extraktum száraz maradékából preparatív rétegkromatográfiás úton (szilikagél, etil-acetát: ciklohexán: etanol = 55 :40 : 5) izoláljuk a 14,16-biszanhidro-gitoxint (Rf = 0,6l). Azonosításához a 15’,16-diacetil-14-anhidro-gitoxint az előbbiek szerint hidrolizáljuk, majd a közömbösítés után kristályosodó 14,16-biszanhidro-gitoxint metanol-víz elegyéből többször átkristályosítjuk. Op.: 228—234 °C; [aß5 : +267° (c = 0,5, metanol); : 221 nm (e: 11 160), 337 nm (e: 17 850). 7. példa A Digitalis lanata drogból enzimes hidrolízissel történő digoxinelőállítás korai fázistermékének 1 g-ját, amely 21% 15’-acetil-digoxint, 16% 15’-acetil-gitoxint, nyomokban 15’-acetil-digitoxint és közel 63% ballaszt anyagot tartalmaz, 15 ml absz. tetrahidrofuránban oldunk. 0,5 ml etil-ortoacetátot és 150 mg p-toluol-szulfonsavat adunk hozzá szobahőmérsékleten, és 2 órán keresztül keverjük a reakcióelegyet. 1 ml víz és 50 mg p-toluol-szulfonsav hozzáadása után 16 órán keresztül 4°C-on tartjuk. A reakcióelegyet trietilaminnal semlegesítjük, majd vákuumban szárazra pároljuk. A párlási maradék kloroformos oldatát vízzel mossuk, majd szárítás után szárazra pároljuk. A száraz maradékot kloroformból kristályosítva 201 mg keveréket izolálunk, mely az eredeti 15’-acetil-digoxin 79%-át tartalmazza. Az eredeti 15’-acetil-gitoxin-tartalom 12%-ának megfelelő mennyiségű 15’,16-diacetil-14-anhidro-gitoxin van jelen a kristályos anyagban. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
