181880. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lamatozid C és származékai keverékekből történő kinyerésére illetve dúsítására
5 181880 6 rogénatomot, R3 hidrogénatomot vagy hidroxilcsoportot jelent - benzollal extraháljuk, s kristályosítással elválasztjuk az adott esetben jelenlevő, R3 helyén hidrogénatomot vagy hidroxilcsoportot tartalmazó VII általános képletű melléktermékektől. A II általános képletű szubsztituált bórsavakat H. R. Snyder, J. A. Kuck és J. R. Johnson módszerével [J. Am. Chem. Soc., 60, 105 (1938)] állítottuk elő a megfelelő R6 -magnézium-halogenid és trimetil-borát reagáltatásával. A fenilbórsav az a) eljárás értelmében pl. a gitoxinnal, diginatinnal és a megfelelő primerglükozidokkal 140,16j3-fenilboronátot képez, a 7ß-hidroxi-digoxinnal végzett reakció során pedig 7/3,14(3-fenilboronát a termék. Mindezek jelentősen apolárisabb vegyületek, mint a reakcióban részt nem vevő, az aglükonon csak 12(3- és I4(3-helyzetű hidroxilcsoportot tartalmazó lanatozid C, vagy a digoxin vagy az acetildigoxin, melyek így egyszerű extrakciós és/vagy kristályosítási művelettel könnyen elválaszthatók. Az V általános képletű ortoészterek például kloroform és nátrium-alkoholát reakciójával (Organic Synthesis, Coll. Vol. 1., 2. kiadás, 258. oldal, John Wiley and Sons, New York, 1948) vagy iminoéter-sók alkoholízisével állíthatók elő [P. P. T. Sah: J. Am. Chem. Soc. 50, 516 (1928)]. A b) eljárással kapcsolatban ismert, hogy a digitoxin és a digoxin vízmentes körülmények között, savkatalizátor jelenlétében etü-ortoacetáttal reagáltatva, végül a terméket vizes közegből izolálva 15’-acetáttá alakíthatók (586 485 számú belga szabadalmi leírás). Ha azonban gitoxin is jelen van a keverékben, felismerésünk szerint e vegyületből nem a megfelelő 15’-acetát képződik, hanem a 15’,16-diacetil-14-anhidroszármazék, amelynek fizikai tulajdonságai eltérnek a monoacetil-származékokétól és ezáltal - például frakcionált kristályosítással - jelentős elválasztás érhető el. Míg a 15’-acetil-digitoxin és a l5’-acetil-digoxín ismert módon lúgos hidrolízissel digitoxinná, illetve digoxinná alakítható, a diacetil-anhidroszármazékból, felismerésünk szerint, 14,16-biszanhidro-vegyület képződik, amelynek a fizikai tulajdonságai szintén jelentősen eltérnek az előbbiekétől, és így például frakcionált kristályosítással további elválasztás hajtható végre. A drog enzimes hidrolízissel történő feldolgozása során izolálható, nagyrészben 15’-acetil-digoxinból és 15’-acetil-gitoxinból álló keveréket az előbb ismertetett körülmények között reagáltatva a 15’-acetil-digoxin nem változik, viszont a 15’-acetil-gitoxin tovább alakul és az előbbi bekezdésben foglaltak szerint elválasztható a digoxintól. Amennyiben a diginatin analóg származékai is előfordulnak a kiindulási glükozidkeverékben, a b) eljárás szerinti reakció során azok szintén 14-anhidro-l5’,16-diacetilszármazékká, illetve lúgos hidrolízissel 14,16-biszanhidroszármazékká alakulnak, amely egyszerű módon elválasztható. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábK kiviteli példákat adjuk meg: 1. példa 48% digoxint, 25% 7(3-hidroxi-digoxint, 4% digitoxint, 6% gitoxínt + diginatint és 17% ballasztanyagot tartalmazó, a 176,249 számú magyar szabadalmi leírás szerinti fermentációból származó 3,0 g szekunder glükozidkeveréket 60 ml metanol és 60 ml benzol elegyében oldunk. 600 mg fenilbórsavat, majd keverés mellett 60 ml vizet adunk hozzá. Az alsó, vizes-metanolos fázist elválasztjuk, újabb 600 mg fenilbórsavat adunk ehhez a reakciókeverékhez, majd 60 ml benzollal extraháljuk. A fázisok szétválasztása után az alsó fázist újabb 60 ml benzollal extraháljuk. Az alsó fázist elválasztjuk, és a metanolt vákuumban eltávolítjuk. A kristályos anyagot szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. A t°rmék súlya: 1,21 g. összetétele: 97% digoxin, 1% gúoxin + diginatin. Digitoxint, 7/3-hidroxi-digoxir t, illetve fenilbórsavas észterét a termék nem tartalmazza. A benzolos frakciók tartalmazzák a 70-hídroxi-digoxin-7,14-fenilbórsavésztert, mely Kieselgel HF254 rétegen (E. Merck, Darmstadt, Német Szövetségi Köztársaság), kloroform-metanol-víz (90 : IC : 0,25) rendszerben Rf: 0,50 értékkel fut. 2. példa 45% digoxint, 25% 7(3-hidroxi-digoxint, 6% digitoxint, 9% gitoxint + diginatint és 15% ballasztanyagot tartalmazó a 176,249 számú magyar szabadalmi leírás szerinti fermentációból származó 500 mg szekunder glükozidkeveréket 50 ml metanol és 50 ml benzol elegyében oldunk. Hozzáadunk 100 mg toluilbórsavat, majd keverés mellett 50 ml vizet. Az alsó, vizes metanolos fázist elválasztjuk, újabb 100 mg toluilbó rsavat adunk ehhez a reakcióelegyhez, majd 50 ml benzollal extraháljuk. A fázisok szétválasztása után az alsó fázist újabb 50 ml benzollal extraháljuk. Az alsó fázist elválasztjuk, a metanolt vákuumban eltávolítjuk. A kristályos anyagot szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. A termék súlya: 115 mg; összetétele: 95% digoxin, 3% gitoxin + diginatin, 0,5%-nál kevesebb digitoxin. 7j3-hidroxi-digoxint illetve toluilbórsavas észterét nem tartalmazza. 3. példa A növényi drogból enzimes hidrolízist követő ex frakcióval történő digoxin-izolálási folyamat melléktermékéből, amely 17% digitoxint, 41% digoxint, 36% gitoxint, 5% diginatint és 1% ballasztanyagot tartalma;;, 4,0 g szekunder glükozidkeveréket 80 ml metanol és 80 ml benzol elegyében oldunk. 800 mg fenilbórsavat, majd keverés mellett 80 ml vizet adunk házzá. A vizes-metanolos fázisban elválasztás után újabb 800 mg fenilbórsavat oldunk, és a reakciókeveréket 80 ml benzollal extraháljuk. A fázisok szétválasztása után az alsó fázist újabb 80 ml benzollal extraháljuk. Az alsó fázist elválasztjuk, a metanolt vákuumban eltávolítjuk, majd a kristályos anyagot szüljük, vízzel mossuk és szárítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
