181799. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kijanimicin előállítására
9 III. táblázat 181799 10 Szénhidrát hasznosítás Vizsgálat Actinomadura Kijaniata Szénhidrátok1 * * * * Kontroll D-arabinóz + L-arabinóz + Dextrin + Dulcit-Eritrit-D-fruktóz L-fukóz D-galaktóz + D-glükóz + a-m-D-glükozid — m-0-D-glükopiranozid ♦ (dfp-zöld) Glicerin + Inozit + Inulin-Tejcukor-Malátacukor ■f D-mannit-D-mannóz + Melibióz-Melizitóz-Raffinóz-L-ramnóz + Ribóz + Szukróz + Trehalóz + D-xilóz + (1) Luedmann és Brodsky módszere [Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1963, 116-124 old. (1964)] szerinti táptalajon. Fermentálás Alkalmas közegben, szabályozott körülmények között fermentálva az Actinomadura kijaniata az itt kijanimicinnek nevezett antibiotikumot termeli. Az antibiotikum termelésére szolgáló fermentálást azzal kezdjük, hogy - rendszerint két vagy három szakaszban végzett - átoltással életerős vegetatív tenyészetet állítunk elő. Az ilyen oltóanyag előállítására alkalmas közeget az alábbiakban A táptalajként és fi táptalajként ismertetünk. A beoltást és a fermentálást olyan közegben hajtjuk végre, amelyben a pH-t 6,5 és 8,5 között, az oltóanyag számára előnyösen 7,5 és a fermentálás számára 7,0 értéken tartjuk. A helyes pH határokat rendszerint úgy tartjuk fenn, hogy a közeghez alkalmas pufferanyagokat, például kalciumkarbonátot adunk hozzá. A vegetatív oltóanyag előállítását és a fermentálást 25 és 45 °C közötti, előnyösen 28 °C és 35 °C közötti hőmérsékleten hajtjuk végre. A vegetatív oltóanyag előállítására és a fermentálás végrehajtására legelőnyösebb hőmérséklet 30 °C körül van. Általában a táptalajt olyan alkalmas fermentáló kádban vagy lombikban állítjuk elő, amelyet a beoltás előtt sterilizálunk, majd lehűtöttünk. De a táptalajt a felhasználás előtt 0 °C alatti hőmérsékleten aszeptikus körülmények között tárolni is lehet. Oltóanyag előállítása A találmány szerinti antibiotikum termelésére előnyös életerősen fejlődő vegetatív oltóanyagot használni. Az oltóanyag előállítását általában két vagy több szakaszban hajtjuk végre. Nagy méretekben való fermentálás (például 50 liter fermentlé ) esetében az oltóanyagot előnyösen három szakaszban állítjuk elő A vegetatív oltóanyag előállítására alkalmas folyékony táptalaj összetétele a következő: A táptalaj húskivonat 3 g triptóz 5 g dextróz 1 g burgonyakeményítő 24 g élesztőkivonat 5 g kalciumkarbonát 2 g csapvízzel kiegészítve 1,0 literre A steril A táptalaj 50 ml-ének beoltására 2 ml frissen felolvasztott Actinomadura kijaniata teljes tenyészetet használunk. A lombikot percenként 300 fordulatú, 5 cm löketű rázógépen 48-96 óra, előnyösen 72 óra hoszszat 30°C-on inkubáljuk. Második oltási szakasz Az első oltóanyag 25 ml-ét használjuk fel arra, hogy 2 literes Erlenmeyer lombikokban levő 500 ml steril A táptalajt beoltsunk. A lombikokat 24-72 óra hosszat, előnyösen 48 óra hosszat 30 °C-on inkubáljuk. Harmadik oltási szakasz A második oltóanyagból 25 ml-rel oltjuk be a 2 literes Erlenmeyer lombikokban levő 500 ml steril B táptalajt. A lombikokat percenként 350 fordulattal keverve, 24-72 óra hosszat, előnyösen 48 óra hoszszat 30 °C-on inkubáljuk. A lombikokat a fermentlé térfogatára számított percenkénti 0,35 térfogat levegővel levegőztetjük. A következő összetételű folyékony táptalajt találtuk alkalmasnak arra, hogy az antibiotikum előállításában kielégítő és reprodukálható kitermeléseket érjünk el. B táptalaj élesztőkivonat 5 g/liter dextróz 10 g/liter oldható keményítő 20 g/liter NZ amin (Difco) 5 g/liter kalciumkarbonát 4 g/liter kobaltklorid 10"6 mól utósterilizálás pH-ja 7,0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
