181741. lajstromszámú szabadalom • Eljárás piridazo-piridazin-származékok előállítására
9 181741 10 A találmány szerint felőállított piridazo-piridazin- származékoknak az angiotenzin-átalakító enzim (ACE) működésére in vitro körülmények között gyakorolt gátló hatását a következő kísérlettel határozhatjuk meg: A vizsgálatot Cushman és Cheung módszerével (Biochem. Pharmacol. 20, 1637—1648) végezzük, a Hayakari és munkatársai (Anal. Biochem. 84, 361—369) által bevezetett módosítások figyelembevételével. Szubsztrátumként 2 mmól hippuril-hisztidil-leucint használunk fel. A szubsztrátumot a vizsgálandó vegyület távollétében, illetve változó menynyiségű vizsgálandó vegyület jelenlétében, 300 mmól nátriumkloridot is tartalmazó 100 mmól káliumfoszfát-pufferoldatban (pH = 8,3) 25 percig 37 °C-on ACE-mel inkubáljuk (össztérfogat: 500 jul). A reakció leállítása céljából az elegyhez 0 °C-on 3 ml 200 mmólos káliumfoszfát-pufferoldatot (pH = 8,3) adunk. Ezután az elegyhez 3% 2,4,6-triklór-s-triazint tartalmazó 1,5 ml dioxánt adunk, és az elegyet a sárga kromofór teljes mértékű kifejlődéséig rázzuk. Ezután az adott esetben képződő szilárd anyagok eltávolítása érdekében a mintákat centrifugáljuk, majd 382 nm hullámhosszon spektrofotometriás úton meghatározzuk a 2,4,6-triklór-s-triazin és a szabad hippursav reakciójában képződött sárga kromofór mennyiségét. IC50 -értéknek azt a vegyületkoncentrádót tekintjük, amely a fenti körülmények között 50%-kal csökkenti a hippuril-hisztidil-leucin ACE által előidézett hasadását. A racém 8-(merkapto-metil)-oktahidro-6,9-dioxo-piridazo[ 1,2-a]piridazin-1 -karbonsav IC5 0 (M) dtéke a fenti körülmények között 6,25 • 10'8. Az (I) általános képletű piridazo-piridazin-származékokat a gyógyászatban az (I) általános képletű hatóanyagot megfelelő gyógyszerészeti hordozóanyagokkal együtt tartalmazó gyógyászati készítmények formájában használhatjuk fel. Hordozóanyagokként enteráis (például orális) vagy parenterális adagolásra alkalmas, szerves vagy szervetlen hordozóanyagokat, például vizet, zselatint, arabgumit, laktózt, keményítőt, magnéziumsztearátot, talkumot, növényi olajokat, polialkilén-glikolokat, vazelint és hasonlókat használhatunk fel. A gyógyászati készítmények szilárd gyógyszerformák (például tabletták, drazsék, kúpok vagy kapszulák) vagy folyékony kompozíciók (például oldatok, szuszpenziók vagy emulziók) lehetnek. A gyógyászati készítményeket szokásos gyógyszertechnológiai kezeléseknek, például sterilizálásnak vethetjük alá, és/vagy a gyógyászati készítményekhez adalékanyagokat, például konzerválószereket, stabilizálószereket, nedvesítőszereket vagy emulgeálószereket, az ozmózisnyomást módosító sókat vagy pufferanyagokat is adhatunk. A gyógyászati készítmények egyéb gy ógyásza tilag értékes anyagokat is tartalmazhatnak. A találmány szerint előállított piridazo-piridazin-származékokat felnőttek kezelésére körülbelül 0,1—100 mg/kg-os, előnyösen körülbelül 1—50 mg/kg-os napi dózisban használhatjuk fel. A szükséges napi dózist egyszerre vagy több részletre elosztva adhatjuk be. Hangsúlyozzuk, hogy a fent közölt dózisértékek csak példálódzó jellegűek; a szükséges napi dózis a kezelt tünetek erősségétől és a beteg állapotától függően a fent közölteknél nagyobb vagy kisebb érték is lehet. Az alkalmazandó dózist a kezelőorvos határozza meg. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 1. példa A) 18,0 g (0,068 mól) racém benziloxikarbonil.he tahidro-piridazin-3-karbonsav 450 ml vízmentes dietiléterrel készült oldatához körülbelül 0,1 mól diazometán éteres oldatát adjuk. A kapott elegyet ezután 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd háromszor 100 ml 10%-os vizes nátrium-karbonát-oldattal és 100 ml vízzel mossuk, magnézium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. Barnás olaj formájábar 18,15 g (96%) racém 1-benziloxikarbonil-hexahidro-piridazin-3-karbonsav-metilésztet kapunk. B) 56 g (0,5 mól) itakonsavanhidrid és 54 g (0,5 mól) benzilalkohol elegyét 2 órán át vízfürdőn melegítjük. Az elegy lehűléskor kristályosodik. Toluol és petroléter elegyéből végzett átkristályosítás után 74,22 g (67%) monobenzil-itakonátot kapunk; op.: 77-82 °C. 20 g (0,091 mól) monobenzil-itakonát és 9,5 ml (0,13 mól) tioecetsav elegyét 3 órán át visszafolyatás közben forraljuk, majd a tioecetsav fölöslegét lepároljuk. 1 -Benzil-3-acetiltiometil-hidrogénszukcinátot kapunk. A kapott félészter vízmentes dietiléterrel készített oldatát jégfürdőn lehűtjük és foszfor-pentakloriddal kezeljük. A megfelelő savkloridhoz jutunk. C) 15,99 g (0,0575 mól) racém 1-benziloxikarbonil-hexahidro-piridazin -3-karbonsav-metilésztert (az A) bekezdés szerint előállított termék) 350 ml metilén kloridban oldunk. Az oldathoz szobahőmérsékleten, erélyes keverés közben, két különböző adagolótölcsérből egyszerre beadagoljuk a B) bekezdés szerint előállított savklorid-oldatot és 137 ml 0,5 mólos vizes nátrium-hidroxid-oldatot (= 0,068 mól nátriumhidroxid). A beadagolás 15 percet vesz igénybe. Az adagolás után az elegyet 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A fázisokat elválasztjuk egymástól, a szerves fázist 200 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk, magnézium-szulfát fölött szárítjuk, majd bepároljuk. 31,34 g barna, olajos maradékot kapunk. A kapott olajos anyagot szilikagélen kromatografáljuk; eluálószerként 4 :1 arányú dietiléter-hexán-elegyet használunk. A racém 1-benziloxikarbonil-2-[2-(acetil-tio-metil)-3-benziloxikarbonil-propionil]-hexahidro-piridazin-karbonsavmetilészter két diasztereoizomerjét kapjuk. Az „A” diasztereoizomer Rf-értéke 0,6, míg a „B” diasztereoizomer Rrértéke 0,5. összesen 20,21 g (63%) terméket kapunk. D) 11,16 g (0,02 mól) „A” diasztereoizomert 25 ml jégecetben oldunk. Az oldathoz 76 ml 45%-os jégecetes hidrogén-bromid-oldatot adunk, és az elegyet 1,25 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az elegyet bepároljuk, a maradékot 125 ml dimetil-foi mamidban felvesszük, az elegyet 0 °C-ra hűtjük, és 4,47 g (0,021 mól) foszfor-pentakloridot adunk hozzá. Az elegyet 30 percig 0 °C-on, majd 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az elegyhez 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
