181731. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 6-[D-2-D-2-amino-3-N-metil-karbamoil-propion-amido)-2-p-hidroxi-fenil acetamido]-penicillánsav tisztítására
11 181731 12 Kitermelés: 96,5%. Nagynyomású folyadékkromatográfia [(A) feltételek mellett vizsgáljuk]: a vizes oldatban szennyeződés nem mutatható ki. 4. példa 7693 ml, előzetesen vízben duzzasztott sztirol-divinilbenzol kopolimer gyantát (pórustérfogata 1,077 ml/g, fajlagos felülete 718m2/g, szemcsemérete 280-370 p, gyártja Mitsubishi Chemical Industries Ltd., márkaneve Diaion HP-20) oszlopba (átmérője 14,0 cm, magassága 50,0 cm) töltünk. 1667 ml 1—(A) példa szerint előállított vizes oldatot (a nyers N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin vizes oldatát) az N’-metil-D-aszparaginil-amoxidllinnek a gyantán való adszorbeálása céljából átvezetünk az oszlopon. Ezután egymás után vizet (1600 ml) és 4 térf./térf.%-os vizes etanolt vezetünk át az oszlopon 2,0 térsebességgel és 7000 ml-enként frakciókat gyűjtünk. A fenti művelet során az (A) és (B) szenynyeződés az 1. illetve a 2. frakcióba, az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin pedig a 3-11. frakciókba eluálódik. Ezzel a művelettel a (C) és (D) szennyeződés nem eluálódik le a gyantáról. A 3-11. frakciókat egyesítjük és így 6300 ml vizes nyers N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin-oldatot kapunk. Az oldat 3,85 mg/ml N’- metil-D-aszparaginÜ-amoxicillint tartalmaz. Kitermelés: 97,0%. , Nagynyomású folyadékkromatográfia [(A) feltételek mellett vizsgáljuk]: a vizes oldatban szennyeződés nem mutatható ki. 5. példa 800 ml, előzetesen vízben duzzasztott sztirol-divinilbenzol kopolimer gyantát (pórustérfogata 0,693 ml/g, fajlagos felülete 300m2/g, szemcsemérete 280-840 ju, gyártja Rohm and Haas, márkaneve Amberlite XAD-2) oszlopba (átmérője 5,25 cm, magassága 37,0 cm) töltünk. 200 ml 1—(A) példa szerint előállított vizes oldatot (a nyers N’-metil-D-aszparaginil-amocillin vizes oldatát) az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillinnek a gyantán való adszorbeálása céljából átvezetünk az oszlopon. Az oszlopon ezután egymás után vizet (2000 ml) és 2 térf./térf.%-os vizes etanolt vezetünk át 4,0 térsebességgel és 1000 ml-enként frakciókat gyűjtünk. A fenti művelet során az (A) és (B) szennyeződés az 1. illetve a 2. frakcióba, az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin pedig a 3-10. frakciókba eluálódik. A (C) és (D) szennyeződés nem eluálódik le a gyantáról. A 3—10. frakciókat egyesítjük és így 8000 ml vizes nyers N’-metil-D-aszparaginil-amoxicill in-oldatot kapunk. Az oldat 3,60 mg/ml N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillint tartalmaz. Kitermelés: 96,0%. Nagynyomású folyadékkromatográfia [(A) feltételek mellett vizsgáljuk]: a vizes oldatban szennyeződés nem mutatható ki. 6. példa (A) N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin szintézise (1) 1,51 g N-(D-2-benziloxikarbonilamino-3-N-metil-karbamoil-propioniloxi)-szukcinimidet és 1,86 g 6-(D-2-amino-2-p-hidroxifenil-acetamido)-penicillánsav-trietilamin-sót feloldunk lOmldimetil-formamidban. Az oldatot 16 órán át keverjük 0-5 °C hőmérsékleten. Az így kapott reakcióelegyhez hozzáadunk 20 ml 5%-os vizes citromsav-oldatot és a reakcióelegyet 40 ml tetrahidrofurán és 20 ml etil-acetát elegyével extraháljuk. Az extraktumot vízzel mossuk, szárítjuk és az oldószer eltávolítása céljából 40 °C alatti hőmérsékleten bepároljuk. A visszamaradó anyaghoz (színtelen karamell) étert adunk és a csapadékot szűréssel összegyűjtjük. 2,35 g 6-[D-(D-2-benziloxi-karbonil-amino-3- N-metilkarbamoil-propionamido)-2-p-hidroxifenil-acetamidc]-penicillánsavat kapunk, színtelen tűk formájában. Kitermelés: 91,9% IRÆ"1 (cm'1): 3280, P70, 1720, 1640 Vékonyrétegkromatográfia (szilikagélen, oldószer tetrahidrofurán/metanol/ecetsav 50 : 50 : 3 arányú elegye): Rf = 0,663 (2) 62,7 g 6-[D-2-(D-2-benziloxi-karbonil-amino- 3 -N -metilkarbamoil-propionamido)-2-p-hidroxifeniiacetamido]-penicillánsavat és 40,0 g 30%-os palládium-báriumkarbonátot 1000 ml metanolban szuszpendálunk. A szuszpenziót szobahőmérsékleten atmoszférikus nyomáson 1 órán át hidrogéngáz-légkörben rázzuk. A hidrogénfelvétel befejeződése után az oldhatatlan anyagot szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet az oldószer eltávolítása céljából 40 °C alatti hőmérsékleten bepároljuk. A visszamaradó anyagé" feloldjuk 250 ml vízben és a vizes oldatot 9 g akt"-’ szénnel kezeljük. 250 ml vizes nyers N’-metií-D-asi paraginil-amoxicillin-oldatot kapunk. A vizes oldat 150 mg/ml N’-metil-D-aszparaginil-amoxiciilint (tisztasága 79%) tartalmaz. Nagynyomású folyadékkromatográfia: [(A) feltételek meÜett vizsgálva] 2. ábra, [(B) feltételek mellett vizsgálva] 3. ábra. (B) N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin tisztítása 800 ml, előzetesen vízben duzzasztott sztirol-divinilbenzol kopolimer gyantát (pórustérfogata 1,077 ml/g, fajlagos felülete 718m2/g, szemcsemérete 280-370 p, gyártja Mitsubishi Chemical Industries Ltd., márkaneve Diaion HP-20) oszlopba (átmérője 5,25 cm, magassága 37,0 cm) töltünk. 170 ml (A) szerint kapott vizes oldatot (a nyers N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin vizes oldatát) az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillinnek a gyantán való adszorbeálása céljából átvezetünk az oszlopon. Az oszlopon ezután egymás után vizet (1600 ml) és 2 térf./térf.%-os vizes etanolt vezetünk át 2,0 térsebességgel és 1000 ml-enként frakciókat gyűjtünk. A fenti művelettel a (B) és (E) szennyeződés az 1. illetve a 2. frakcióba, az N’-metil-D-aszparaginü-amoxicillin pedig a 3-8. frakciókba eluálódik. A (C) és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
