181659. lajstromszámú szabadalom • Fémszol-részecskével jelzett immuno-vizsgálati módszer
5 181659 6 két alkalmazzunk a fém-szol részecskék bevonásához, mert bár ez stabilizáló hatással jár, az immunokémiai aktivitás kisebb lesz a vártnál, valószínűleg a térbeli gátlás következtében. Emiatt szintén előnyösnek bizonyul valamely immuno-komponenssel csak részben végzett bevonás, amelyet követően a bevonást más védő, de immunokémiailag inert anyaggal, így inert proteinekkel, például albuminnal, polietilén-glikollal vagy más poláros makromolekulákkal tesszük teljessé. Bevonó anyagként használható az A protein vagy ezzel rokon proteinek, amelyek aktivitással rendelkeznek az antitestek Fc részének vonatkozásában. A fém-szol részecskék A proteinnel történő bevonása után egy további bevonás végezhető valamely kiválasztott antitesttel. Egy másik lehetőség az, amikor először a fém-szol részecskéket valamely inert hidrofil molekulával, például egy polimerrel vagy kopolimerrel bevonjuk, majd az immunológiai komponenst adszorpcióval vagy kovalens kötéssel a bevonó anyaghoz kapcsoljuk. A bevonás után kapott részecskék (gömböcskék) tartalmazhatnak egyetlen fém-szol részecskét, de az is lehet, hogy a polimer egynél több fém-szol részecskét foglal magába. A fém-szol részecskék inert polimerrel történő bevonását kétféleképpen végezhetjük, vagy úgy, hogy a fémszolt hozzuk kapcsolatba a polimerrel, vagy pedig a fém-szolt monomert vagy különböző monomereket tartalmazó közeghez adjuk, mikoris ezeket in situ polimerizációra, illetve kopolimerizációra késztetjük. A polimerizációt iniciálhatjuk sugárzással vagy iniciátorok, mint perszulfát hozzáadásával. A fém-szol részecske monomer közeg — melyben a részecskét elhelyezzük — polimerizációjával elvégzett bevonása szervetlen iniciátor, mint perszulfát alkalmazásával gyakorlati nehézségeket támaszt, mivel a szol flokkulál ilyen iniciátorok hozzáadására. Azt találtuk, hogy az ilyen bevonás lehetséges a fém-szol részecskék védelmével, amikor a védett részecskét monomer közegbe vezetjük, végül a polimerizációt iniciáljuk. A bevonatot alkotó polimerek védőanyagoknak tekinthetők. A fém-szol részecskékkel jelzett komponenseket reagensként alkalmazzuk, általában kombinálva vizes közegben levő receptor proteinek és haptének, antigének és antitestek kimutatásához és meghatározásához használatos egyéb reagensekkel, amelyeket az immunokémiai módszerek — gyakorlatilag radio-immuno és enzim-immuno vizsgálatok — valamennyi ága hasznosít. Következésképpen a találmány immunokémiai módszerekhez alkalmazható reagens-csomagokra is vonatkozik, amelyek legfontosabb komponensként fém-szol formájú fémjelzett immunokomponenst tartalmaznak, és a fém-szol részecskéi akár közvetlenül a kívánt immunokomponenssel, akár egy inert makromolekulával — amelyhez az immunokomponens kapcsolódik, vagy adszorbeálódik — vannak bevonva. A használatos immunokémiai módszerek egyike a kompetitiv immuno-vizsgálat, mely valamennyi immunokomponens kimutatásánál és vizsgálatánál alkalmazható. Például bizonyos antigének kimutatásánál ez a módszer abban áll, hogy a nem ismert mennyiségű antigént tartalmazó vizsgálati mintát kapcsolatba hozzuk az érintett fém-jelzett antigén és ezen antigén elleni oldhatatlan antitest bizonyos mennyiségével vagy az oldhatatlan antigén és ezen antigén elleni fém-jelzett antitest bizonyos mennyiségével. A kívánt reakcióidő után a fém milyenségét és/vagy mennyiségét a kötésben levő vagy szabad részben meghatározzuk, és így a meghatározandó antigénre egy kvalitatív, illetve kvantitatív értékelést kapunk. A részleteknél esedékes változtatásokkal analóg eljárás alkalmazható más immunokomponensek meghatározására is. Az úgynevezett „szendvics” módszerek szintén elterjedtek. Ezek különösen alkalmasak a találmány szerinti fém-jelzett komponens használatára. Ilyen módszerek alapján valamely immunológiai komponenst — például egy antitestet, ha az antigént kell meghatározni — szilárd hordozóhoz történő kapcsolással oldhatatlanná teszünk. Ez a szilárd hordozó például annak a reakcióedénynek a belső felülete, amelyben az immunokémiai reakciót végezzük. A kezdeti inkubáció után, vagy kívánt esetben a mosási lépési követően, a fém-jelzett antitesttel végzett második inkubáció történik, majd a kötött vagy szabad fázisban levő fémet meghatározzuk. Előnyös, ha a fémet kötött fázisban határozzuk meg. Ez esetben a fázisok szeparálása után a kötött rész előnyösen leválasztható, úgy hogy a fém az ilymódon nyert folyadékban már meghatározható. Továbbá homogén agglutináció is használható. Ha a vizsgálati minta a meghatározandó immunokémiai komponenst tartalmazza, az agglutináció a jelzett immunokémiai komponenssel történik, amely az optikai tulajdonságok megváltozását eredményezi. Kvalitatív vagy szemikvalitatív eredményt a színváltozás figyelemmel kísérésével nyerhetünk. Lehetséges azonban a megfigyelést a reakció során spektrofotométerrel végezni. A fentebb ismertetett módszereken kívül igen sok immunokémiai módszer létezik, amelyekben a fémjelzett immuno komponens reagensként használható. A jelen lalálmány lehetővé teszi, hogy kimutassunk különböző hapténeket, antigéneket, antitesteket vagy azok kombinációit egyidejűleg ugyanabból a vizsgálati mintából olymódon, hogy a meghatározandó komponens mindegyikéhez reagensként egy olyan immunokomponenst all almazunk, amelyet különböző fém-szol részecskével jeleztünk. A képződött fémtartalmú agglomerátum és/vagy fém fizikai tulajdonságainak és/vagy koncentrációjának mérésére a reakcióelegy valamelyik fázisában számos módszer ismeretes, amelyek önmagukban véve ismertek. Ezen módszerek közül példaként megemlíthető a kolorimetrikur. meghatározás, amelyben néhány diszperzió élénk sz'nét használjuk fel, amikoris fizikai-kémiai változások következtében a szín is megváltozik; a vizuális módszer, amely igen gyakran felel meg kvalitatív meghatározások céljára a fentiekben említett azon tény következtében, hogy a fém-szolok színesek ; a láng emiszsziós spektrofotometria vagy más plazma-emissziós spektrofotometrikus módszer, amelynek alkalmazása lehetővé teszi az egyidejű meghatározást; és a rendkívül érzékeny lángnélküli atom-abszorpciós spektrofotometria módszere. A találmány köre szintén kiterjed vizes közegben levő specifikus kötődésű protein és annak megfelelő, kötőképes anyag közötti reakció egy vagy több komponensének meghatározásához használható reagens-csomagra, amely fo alkotóelemként olyan fém-jelzett komponenst tartalmaz, amelyet az említett reakció komponensének fém, fém-vegyület vagy fémmel, illetve fém-vegyülettel bevont polimer mag részecskéihez történő kapcsolásával nyerünk és amely részecskék mérete legalább 5 nm. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
