181659. lajstromszámú szabadalom • Fémszol-részecskével jelzett immuno-vizsgálati módszer
3 181659 4 utóbb megnevezett meghatározás elvben analóg az ismert radio-immunológiai meghatározásokkal, azzal a különbséggel, hogy radioaktív jelzés helyett enzimet használnak jelzőkén t. A széles körben használt radio-immunológiai meghatározások vitathatatlanul nagy előnnyel rendelkeznek, de sok alapvető hátrány is megtalálható ennél a módszernél, mint a veszélyeztetettség a radioaktív anyaggal történő munka során, a reagensek és készülék magas árai, a radioaktív jelzett reagensek kis stabilitása és az a követelmény, hogy csak szakképzett személyzet végezhet ilyen meghatározásokat. Az enzim-immunológiai meghatározási módszer nem rendelkezik ezekkel a hátrányokkal, de mindazonáltal kívánatos egy új meghatározási módszert kifejleszteni, amely érzékenyebb, gyorsabban kivitelezhető, könnyen automatizálható és/vagy lehetővé teszi egyidejűleg több immunokomponens meghatározását. Továbbá, igen komoly igény van egy megbízható és praktikus módszer receptor proteinekre történő kidolgozására. A jelen találmány vizes vizsgálati mintákban levő valamely specifikus kötő protein és megfelelő kötőképes partnere közötti reakció egy vagy több komponensének a kimutatási és/vagy meghatározási módszerére vonatkozik, amikoris ezeknek a komponenseknek a másikhoz való ismert kötődési affinitását használjuk fel. A találmány szerinti eljárás azzal jellemezhető, hogy egy vagy több olyan jelzett komponenst használunk, amelye(ke)t az említett reakció egyik komponensének valamely fém, fém-vegyület vagy fémmel, illetve fém-vegyülettel borított polimermag vizes diszperziójának a részecskéihez (amelyek mérete legalább 5 nm) történő direkt vagy indirekt kapcsolásával nyerünk, amikoris a reakció alatt vagy megfelelő reakcióidő után — kívánt esetben a kötött és szabad jelzett-komponensek elkülönítése után — a fém és/vagy a képződött, fémtartalmú agglomerátum fizikai tulajdonságait és/vagy mennyiségét meghatározzuk a kísérleti mintában vagy a keletkező frakció egyikében önmagukban ismert módszerek segítségével. A meghatározás a kimutatni és/vagy meghatározni kívánt komponens vagy komponensek kvalitatív és/vagy kvantitatív indikációjára alkalmas. A találmány szerinti eljárás különösen alkalmas olyan immunokémiai komponensek meghatározására, mint a heptének, antigének és antitestek. A fém, fém-vegyületek és fémmel vagy fém-vegyülettel borított polimer magok vizes diszperziójának a részecskéi legalább 5 nm, de lehetőleg 10 és 100 nm közötti szemcseméretűek. A diszpergált fázis 10 és 100 nm közötti szemcsemérctű diszperziói általában szolok, de a diszperziók más típusai sincsenek kizárva. A jelzendő komponenst direkt vagy indirekt módon kapcsoljuk a diszpergált részecskékhez. Kapcsolás alatt értünk bármilyen kémiai vagy fizikai kötést, mint kovalens kötést, hidrogén hidat, poláros vonzást és adszorpciót. Bármikor is „fém-szol részecskék” megjelölést használunk a következőkben a szövegben, mindig azokat a szol részecskéket értjük, amelyek fémet, fém-vegyületet vagy fémmel vagy fém-vegyülettel borított polimer magot tartalmaznak. A fém-szol részecskék, különösen az arany-szolok használatát — melyek felületét antitestekkel borították a sejt felületen történő antigén megoszlás demonstrációjához végzett scanning elektronmikroszkópos vizsgálatnál, mely során a fém-szol részecskéket jelzést kiemelő kontrasztként alkalmazták — némely évvel ezelőtt már leírták (Id. M. Horisberger : Experimentia 1147—1149. oldalain irt cikkét, 1975. okt. 15.), de a diszpergált részecskék alkalmazását, előnyösen fém-szol részecskék jelzőként történő alkalmazását az immunológiai komponensek, mint haptének, antigének és antitestek vizes közegben végzett in vitro kvalitatív és kvantitatív meghatározására mind ez ideig irodalomban nem említik, mi mégis meglepő módon lehetséges megoldásnak találtuk. Az általunk kifejlesztett találmány szerinti fém-szol részecskéi alkalmazó immunokémiai technika nemcsak érzékenyebb eljárás, mint a már ismert radio- és enzim-immuno nódszcrek, hanem további lehetőséget nyújt egynél több immunológiai komponens ugyanabból a vizsgálati közegből történő egyidejű kimutatására és meghatározására különböző kémiai összetételű szol részecskék jelzőként történő felhasználásával. A fém szolok lehetnek fémek vagy fém-vegyületek, mint fém oxidok, fém-hidroxidok és fém-sók vagy fémmel, illetve fém-vegyülettel borított polimer magok. Példaképpen fémként megemlíthetőek a platina, arany, ezüst és réz, valamint fémvegyületként az ezüst-jodid, ezüst-bro nid, réz-oxid-hidroxid, vas-oxid, vas-hidroxid vagy vas-oxid-hidroxid, alumínium-hidroxid vagy alumínium-oxid-hidroxíd, króm-hidroxid vagy króm-oxid-hidroxid, vanádium-oxid, arzén-szulfid, mangán-hidroxid, óbm-szulfid, higany-szulfid, bárium-szulfát és titán-dio>id- Általában valamennyi fém vagy fém-vegyület ismert eljárások alapján könnyen felhasználható. Sokszor mutatkozik előnyösnek az, ha a fentebb említett fémekkel vagy fém-vegyületekkel borított polimer magot alkalmazzuk, mint a szolok diszpergált részecskéit. Ezek a részecskék hasonló tulajdonságokkal rendelkeznek , mint a tiszta fémek vagy fémvegyületek diszpergált fázisa, de ezek mérete, sűrűsége és fém-tartalma optimálisan változtatható. Előnyösen alkalmazhatók azok a fémek vagy fémvegyületek, amelyek vagy nincsenek vagy csak nagyon kis mennyiségben vannak jelen a vizsgálati közegben, különösen azok a fémek vagy fém-vegyületek, amelyeknek alacsony a detektálhatósági küszöbe a megfelelő analitikai eljárásokban. A jelzőként használható fém-szol részecskéket igen sok módszerrel állíthatjuk elő, amelyek önmagukban véve már ismertek. Például az arany-szol készítését G. Frens cikke alapján [Nature Physical Science 241, 20 (1973)] végzik. A fém-szol részecskék további szerepe megnyilvánulhat abban, hogy a kölcsönös taszítóerő következtében bizonyos stabilizáló hatást is kifejtenek. Főleg erős elektrolitek hozzáadásával a helyzet megváltozik, annak eredményeképpen aggregáció és flokkuláció figyelhető meg. Mindez k;védhető, ha a részecskéket poláros csoportokat hordozó olyan makromolekulákkal vonják be, mint a proteinek, polietilén-glikolok, polimer szénhidrátok, polivinilalkoholok és hasonlóak. Védő proteinekként lehet alkalmazni antigéneket, antitesteke t és anti-antitesteket vagy azok immunokémiailag aktív fragmenseit vagy hapténeket, amelyeket immunokómiailag inert, védő makromolekulákhoz kapcsolnak és így közvetlenül fém-szol részecskékkel jelzett immuno-komponenseket kapnak. Nem szükséges, hogy kizárólag immuno-komponense5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
