181560. lajstromszámú szabadalom • Eljárás olajjal vagy olajszármazékokkal szennyezett talajok javításához alkalmas mikrokultúra (starterkultúra) előállításához
3 181560 4 zetvédelmi céllal állítsunk elő, szénhidrogénnel, vagy származékaival szennyezett talajok javítására. A találmány eljárás starter-kultúra előállítására olajjal és (vagy olajszármazékokkal) egyéb szénhidrogénekkel szenynyezett talajok javítására szolgáló mikrokultúra előállítására, melynek során az egyes törzsekből, vagy azok populációiból, vagy együttes keverékpopulációiból starter-kultúrát készítünk. A starter-kultúrát 0,2—0,8% szénforrást, mely kőolaj vagy annak származéka, — 0,1—0,6% szervetlen nitrogénforrást, 0,1—0,5% szerves nitrogénforrást, továbbá 0,1—1% kalciumot és nyomelemeket is tartalmazó táptalajon természetes bioszfaktor forrás jelenlétében —, ahol a bioszfaktor forrás vitamin, aminosav és fehérjetartalmú kivonat, előnyösen kukoricalekvár vagy élesztő, továbbá talajkivonat —, 3,0 —8,0 pH tartományban, determinált körülmények között tenyésztjük, majd a táptenyészlevet lefejtjük és 10—25 C°-ra lehűtve a szennyezett talajba juttatjuk, vagy a felhasználásig tároljuk. A starter-kultúra előállítására az előnyös kivitelnél Nocardia corallina, Noccardia opaca, Noccardia rubropertincta, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas Fluorescens, Candida lipolytica szelektált egyes törzseit és (vagy azok populációit és) vagy keverékpopulációit alkalmazzuk. A találmány szerinti eljáráshoz permanens olajszennyeződésnek kitett talajokból szelektált kevert populációkból a következő törzseket választottuk ki, melyeket továbbszaporítva letétbe helyeztünk. Fajta: Nocardia corallina (L. Sz: 00155/1976.) Optimális növekedés: Sabouraud táptalajos 22—25 C°. Telepek típusa: kerek, konvex, sima, rószaszín, fénylő, vagy matt. Morfológia: 1,0 —1,5x3,0—10,0 mikron nagyságú, kissé görbült, elágazó pálcikák; idősebb korban kokkuszok. Zselatint nem folyósítja, nitrátokból nitriteket képez, szénhidrogéneket és szénhidrogén származékokat — köztük fenolt és n-krezolt — szénforrásként hasznosít. Fajta: Nocardia opaca (L. Sz: 00156/1976.) Optimális növekedés: Sabouraud táptalajon 30 C°. Telepek típusa: sima, konvex, krém-szín, vagy rózsaszín. Morfológia: 0,8—1,0x2,0 —16,0 mikron nagyságú, hosszú, meggörbült, szabálytalan és elágazó fonalak, vagy pálcikák. Nitrátokból nitriteket képez, a szénhidrogéneket és származékait —, köztük fenolt és naftalént — szénforrásként hasznosítja. Fajta: Nocardia rubropertincta. (L. Sz: 00157/1976.) Optimális növekedés: Sabouraud táptalajon 20—37 C°. Telepek típusa: vörös, szabálytalan szélű, gyűrt felszínű. Morfológia: 0,3 —0,9 x 1,5—3,0 mikron nagyságú, rövid pálcikák. Fonalakat és kokkoid formákat is képez. Nitriteket nitrátokból nem képez, zselatint nem folyósít, szénhidrogéneket és szénhidrogén származékokat —, köztük benzolt, petróleumot, paraffint — szénforrásként hasznosít. Fajta: Pseudomonas aeruginosa. (L. Sz: 00158/1976.) Optimális növekedés: Sabouraud táptalajon, 37 C°. Telepek típusa: kerek, ívelt. Morfológia: 0,5—0,6x1,5 mikron nagyságú pálcikák, egy vagy három poláris ostorral. A szúrt zselatint gyorsan elfolyósítja, a vérszérumot elfolyósítja, a vért hemolizálja, a nitrátokat nitritté és N2 alá redukálja. A szénhidrogéneket és szénhidrogén származékokat egyedüli szénforrásként hasznosítja. Fajta: Pseudomonas fluorescens. (L. Sz: 00159/1976.) Optimális növekedés: Sabouraud táptalajon 37 C°. Telepek típusa: kerek, iveit. Morfológia: 0,3—0,5 x 1,0—1,8 mikron nagyságú pálcikák, egy poláris ostorral. A nitrátot nitritté és ammóniává redukálja, glükózból savat képez, a zselatint elfolyósítja. Szénhidrogéneket és szénhidrogén származékokat egyedüli szénforrásként hasznosítja. Fajta: Candida lipolytica. (L. Sz: 00160/1976.) Optimális növekedés: Sabouraud táptalajon, 30 C°. Telepek típusa: kerek, kissé fénylő felületű, kenődő konzisztenciájú. Morfológia: Pseudomicéliumot és elágazó micéliumot képez. Asszimilálja a glükózt, gyengén az etanolt, galaktózt, szaharózt, maltózt, nem asszimilálja a laktózt. Az arbutint hasítja. A szénhidrogéneket és szénhidrogén származékokat egyedüli szénforrásként hasznosítja. A továbbiakban a találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi példákat adjuk: 1. példa: 100 lit. csapvízben 0,4% ammóniumszulfátból, 0,05% foszforsav kalciumsójából, 0,3% kalciumkarbonátból, 1% talajkivonatból, 1,4 tf% kénmentesített gázolajból elkészített nyomelemeket is tartalmazó táptalajt (pH a sterilezés előtt 7,0) 120 C° hőmérsékleten 20 percig sterilezünk. A 28 C° visszahűtött táptalajt a fent felsorolt és letétbe helyezett egyes törzsekből, vagy azok együtteséből álló kevert populáció 72 órás tenyészetével beoltjuk, célszerűen 5 lit. inokulum 100 lit. táptalaj arányban, miközben levegőztetést végzünk. A levegőztetés intenzitása 100 lit. levegő/100 lit táptalaj/perc. A levegőztetés kevertetéssel történik, a kevertetés sebessége n = 370/perc. A készülékben levő nyomás: 0,4—0,5att. A fermentációt 120 órán át végezzük, 28 ± 2 C° hőmérsékleten. A maximális csíraszám elérésénél (8,6 x 109 csíra (ml/120 óra) a tenyészetet önmagában ismert módon lefejtjük és felhasználjuk, vagy a felhasználásig +4 C°-on tároljuk. Biomassza produkció: 1,7656 g/100 ml/ 120 óra. Szénhidrogénbontás hatásfoka 89,67%/! 14 óra. 2. példa: 200 liter csapvízben 0,2% foszforsav ammóniumsójából, 0,1% kálisóból, 0,2% nátriumkloridból, 0,3% kalciumkarbonátból, 0,3% kukoricalekvárból, 1,2 tf% kőolaj-gázolaj 3 :2 keverékéből nyomelemeket is tartalmazó táptalajt készítünk. (pH sterilezés előtt 7,0). Ezt a táptalajt 120 C° hőmérsékleten, 20 perc időtartamig sterilezzük. A 30 C°-ra visszahűtött táptalajt a fentebb felsorolt egyes törzsekből, vagy azok együtteséből, vagy kevert populációiból álló 72 órás tenyészetével oltjuk be, előnyösen 10 lit. inokulum 200 lit. táptalajhoz és levegőztetést végzünk. A levegőztetés intenzivitása: 200 lit. levegő/200 lit. táptalaj/perc. A kevertetés sebessége n = 350/perc. A készülékben levő nyomás: 0,4—0,5 att. A fermentációt 120 órán át végezzük, 28±2 C° hőmérsékleten. A maximális csíraszám elérésénél (8,2 x 109 csíra/ml.) 120 óra) a tenyészetet edénybe lefejtjük és felhasználjuk, vagy a felhasználásig +4C°-on tároljuk. A biomassza produkció 2,05 g/100 ml. A szénhidrogén bontás hatásfoka: 85,0%/120 óra. 3. példa: 700 liter csapvízben 0,2% foszforsav ammóniumsójából, 0,16% kálisóból, 0,2% nátriumkloridból, 0,3 kalciumkarbo-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 i
