181560. lajstromszámú szabadalom • Eljárás olajjal vagy olajszármazékokkal szennyezett talajok javításához alkalmas mikrokultúra (starterkultúra) előállításához
5 181560 6 nátból, 0,3% kukoricalekvárból, 1,2 tf% kőolaj-gázolaj 3 : 2 arányú keverékéből elkészített, nyomelemeket is tartalmazó (pH sterilezés előtt 6,5) 90C°-on 30 percig sterilezünk. A 30 C°-ra visszahűtött táptalajt a fent felsorolt egyes törzsekből, vagy azok keverékéből álló kevert populáció 48 órás tenyészetével beoltjuk, 60 lit. inokulum 700 lit táptalajhoz arányban. Levegőztetés: 700 lit. levegő/700 lit táptalaj/perc. Kevertetés: levegődiszperzáló gyűrűvel. A fermentációt 68 órán át folytatjuk, 28 ±2C° hőmérsékleten. Csíraszám a fermentáció befejeztekor 8,6 x 108 csíraszám (ml.) 68 óra. A tenyészetet ipari léptékű ionkulumnak használtuk fel, 35.000 literes hasznos térfogatú fermentációban. Biomassza produkció: 7,0 g/1,000 ml. Szénhidrogénbontás hatásfoka: 69%/68 óra. 4. példa: 35.000 lit. csapvízben 0,2% foszforsav ammóniumsójából, 0,1% kálisóból, 0,2% nátriumkloridból, 0,3% kalciumkarbonátból, 0,3% kukoricalekvárból, 1,2 tf% kőolaj-gázolaj 3 : 2 keverékéből elkészített nyomelemeket is tartalmazó táptalajt (pH sterilezés előtt 7,0) 90C°-on 30 percig sterilezünk. A 30 C°-ra visszahűtött táptalajt a 3. példa szerint előkészített inokulummal beoltjuk. Levegőztetés: 35.000 lit. levegő/ 35.000 lit. táptalaj/perc. Kevertetés: n = 60 perc. A fermentációt 69 órán át végeztük 28 ± 2 C° hőmérsékléten. Csíraszám a fermentáció befejeztekor: 6,5 x 109 csíraszám (ml.) 69 óra. Biomassza produkció 4,6 g/1.000 ml. Szénhidrogénbontás hatásfoka: 70%. A tenyészetet a fermentáció befejeztekor visszahűtjük 20 C°-ra, edénybe, vagy tartályba fejtjük és a felhasználás helyére szállítjuk. 5. példa: 35.000 lit. csapvízben 0,2% foszforsav ammóniumsójából, 0,1% kálisóból, 0,2% nátriumkloridból, 0,3% kalciumkarbonátból, 0,3% kukoricalekvárból, 1,2 tf% kőolaj-gázolaj 3 : 2 arányú keverékéből elkészített nyomelemeket is tartalmazó táptalajt (pH a sterilezés előtt 7,0) 90 C° hőfokon 30 percen át sterilezzük. A 30 C°-ra visszahűtött táptalajt a fentebb felsorolt egyes törzsek, vagy azok keverékéből álló szénhidrogénbontó populáció két lépcsőben készített (I. lépcső: 100 lit. 48 órás, II. lépcső: 200 lit. 59 órás) 700 lit. inokulumával oltjuk be. Levegőztetés: 35.000 lit. levegő/35.000 lit táptalaj/ perc. Kevertetés n = 60/perc. A fermentációt 74 órán át végezzük 28 ± 2 C° hőmérsékleten. Csíraszám a fermentáció befejezésekor: 9,5 x 109 csíraszám/ml. Biomassza produkció: 7,8 g/1.000 ml. Szénhidrogénbontó aktivitás: 84,5%. A tenyészetet a fermentáció befejezése után visszahűtjük kb. 20 C°-ra, lefejtjük és a felhasználás helyére szállítjuk. 5 A találmány szerinti eljárással olyan starter-kultúrát tudunk előállítani, amelynek csíraszáma a példák szerint a folyamat befejeztekor 107—109 csíraszám /ml., olajbontó aktivitása magas szénhidrogénfrakcióknál 5—8g/lit./120 óra, míg CI8—C2o frakcióknál 0,5—0,8 g/lit/120 óra. 10 A találmány szerinti eljárással előállított kultúra előnye, hogy kiválóan alkalmas arra, hogy a talajszennyeződést okozó, főleg kőolaj és származékai vagy lepárlási termékeinek biológiai oxidációját gyorsan elindítsa, majd lefolytassa. A találmány nagy előnye, hogy a mikrobiológiai kultúra 15 előállításának technológiája rendkívül egyszerű, az elszaporítási idő rövid, a kultúra fertőzésre nem,érzékeny. A találmány különös előnye, hogy olyan keverékpopuláció előállítását valósítja meg, amely meghatározott szénlán- 20 cú származékok esetén a teljes biológiai oxidáció elvégzésére alkalmas. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás szénhidrogénekkel, főleg kőolajjal és olajszármazékokkal szennyezett talajok javítására alkalmas mikrokultúra előállítására, azzal jellemezve, hogy izolált egyes szénhidrogénbontó törzseket, vagy azok kevert, vagy együttes keverékpopulációit, valamint 0,2—0,8% szénforrást -, mely előnyösen kőolaj vagy annak származéka —, 0,1— 0,6% szervetlen nitrogénforrást, célszerűen 0,1—1% kalciumot és nyomelemeket is tartalmazó táptalajon, természetes bioszfaktor forrás jelenlétében —, ahol a bioszfaktor forrás vitamin, aminósav és fehérjetartalmú kivonat, előnyösen kukoricalekvár, és/vagy élesztő és/vagy talajkivonat — 3,0 —8,0 pH tartományban, determinált körülmények között tenyésztjük, majd a kapott táptalajlevet lefejtjük és 10— 25 C°-ra lehűtve a szennyezett talajba bejuttatjuk, vagy a felhasználásig +1—10C° között, előnyösen +4C° körüli hőmérsékleten tároljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a mikro-organizmus starter-kultúra előállítására Nocardia corallina, Nocardia opaca, Nocardia rubropertincta, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Candida lipolytica szelektált törzstenyészetét és (vagy törzs v. törzsek) egyes (populációit és) vagy azok keverékpopulációit alkalmazzuk. 25 30 35 40 45 A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 84.5408.66-4 Alföldi Nyomda, Debrecen, Felelős vezető: Ben kő István igazgató
