181442. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminocukor-származékok előállítására
19 181442 20 III. Tresztatin-komplex szétválasztása tresztatin A, B és C komponenssé 10,6 g, az V. lépésben nyert port 20 ml desztillált vízben oldunk és az oldatot Amberlit CG 50-t (keverékágy, mely 3,5 rész ammónium-formában és 6,5 rész H-formában levő gyantából áll, 1420 ml, I. típusú) tartalmazó oszlopra (78 x 4,8 cm) visszük fel. Az oszlopot desztillált vízzel 2,0 ml/perc sebességgel eluáljuk és az eluátumot 14 ml-es frakciókban gyűjtjük össze. Az aktív frakciókat az alábbi paraméterek mellett nagynyomású folyadék kromatográfiának vetjük alá: Oszlop: u Bondapak/szénhidrát (1,4" x r, Waters Associate) Hordozó: Metilcianid—víz (63 : 37) Átfolyási sebesség: 4,0 ml/perc Befecskendezett térfogat: 2—10 pl Kimutatás: 210 nm-nél mért ultraibolya abszorpció. A megfelelő frakciókat egyesítjük, bepároljuk és liofilizáljuk. A kapott eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze: Frakció száma Maradék súlya (g) Aktivitás (IU/g) Főkomponens (retenciós idő) 71— 90 1,40 9,4 x 10« Tresztatin B 131—165 1,88 5,9 x 107 (3,4 perc) Tresztatin A 311—380 0,79 4,4 x IQ7 (5,5 perc) Tresztatin C (8,8 perc) IV. Tresztatin A előállítása Tiszta tresztatin A készítményt Amberlit CG 50-n történő re-kromatografálással állítunk elő. 1,17 g, a II. sz. bekezdés szerint előállított tresztatin A-t 4 ml desztillált vízben oldunk, majd az oldatot Amberlit CG 50-t (keverékágy, mely 8 rész H-formában levő és 2 rész ammónium-formában levő gyantából áll; 300 ml, II. típusú) tartalmazó oszlopra (133 x 1,7 cm) visszük fel. Az oszlopot desztillált vízzel eluáljuk és az eluátumot 7 ml-es frakciókban gyűjtjük össze. Az egyes frakciókat a korábbiakban ismertetett nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel követjük nyomon. . a tresztatin A-t tartalmazó 245—465 sz. frakciót egyesítjük, bepároljuk és liofilizáljuk. Fehér por alakjában 649 mg, a fent ismertetett tulajdonságokkal rendelkező tresztatin A-t kapunk. V Tresztatin B előállítása Tiszta tresztatin B készítményt Amberlit C»j 50-n történő re-kromatografálással állítunk elő. 450 mg, a III. sz. bekezdés szerint előállított tresztatin B-t 2 ml desztillált vízben oldunk és az oszlopot Amberlit CG 50-t (keverékágy, mely 8 rész H-formában levő és 2 rész ammónium-formában levő gyantából áll; 280 ml, II. típusú) tartalmazó oszlopra (122 x 1,7 cm) visszük fel. Az oszlopot desztillált vízzel eluáljuk, az eluátumot 3 ml-es frakciókban gyűjtjük össze és a fentiekben leírt nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel követjük nyomon. A tresztatin B-t tartalmazó 121—129 sz. frakciót egyesítjük, bepároljuk és liofilizáljuk. Fehér por alakjában 170 mg, a fenti tulajdonságokkal rendelkező tresztatin B-t kapunk. VI. Tresztatin C előállítása Tiszta tresztatin C készítményt Amberlit CG 50-n történő re-kromatografálással állítunk elő. 720 mg, a III. sz. bekezdés szerint előállított tresztatin C-t 3 ml desztillált vízben oldunk és az oldatot Amberlit CG 50-t (keverékágy, mely 6,2 rész H-formában levő és 3,8 rész ammónium-formában levő gyantából áll; 300 ml, II. típusú) tartalmazó oszlopra (133 x 1,7 cm) visszük fel. Az oszlopot desztillált vízzel eluáljuk és az eluátumot 6 ml-es frakciókban gyűjtjük össze, melyeket a fentiekben ismertetett nagynyomású folyadékromatográfiás módszerrel követünk nyonon. A tresztatin C-t tartalmazó 42—59 sz. frakciót egyesítjük, bepároljuk és liofilizáljuk. Fehér por alakjában 515 mg, a fentiekben leírt tulajdonságokkal rendelkező tresztatin C-t kapunk. 2. példa Tresztatin A-hidroklorid előállítása 95 mg tresztatin A-t 1 ml desztillált vízben oldunk és az oldat pH-ját 0,1 n sósav hozzáadásával 2,0 értékre állítjuk be. Az oldatot vákuumban kb. 0,5 ml-re bepároljuk, majd 6 ml etanolt adunk hozzá, a képződő fehér csapadékot centrifugálással összegyűjtjük, 2 ml etanollal mossuk és vákuumban szárítjuk. Fehér por alakjában 97 mg tresztatin A-dihidrokloridot kapunk. 3. példa Tresztatin B-hidroklorid előállítása 92 mg, az 1. példa szerint előállított tresztatin B-t 1 ml desztillált vízben oldunk és az oldat pH-ját 0,1 n sósavval 2,0 értékre állítjuk be. Az oldatot vákuumban kb. 0,5 ml-re bepároljuk, majd 7 ml etanollal elegyítjük. A kiváló csapadékot centrifugálással elválasztjuk, 2 ml etanollal mossuk és szárítjuk. Fehér por alakjában 91 mg tresztatin B-monohidrokloridot kapunk. 4. példa Tresztatin C-hidroklorid előállítása 90 mg, az 1. példa szerint előállított tresztatin C-t t ml desztillált vízben oldunk és az oldat pH-ját 0,1 n sósavval 2,0 értékre állítjuk be. Az oldatot 0,5 ml-re bepáioljuk 6 m1 etanollal elegyítjük, centrifugáljuk, a csapadékot 2 m. eu nollal mossuk és szárítjuk. Fehér por alakjáoan 91 mg tresz tatin C-trihidrokloridot kapunk. 5. példa Az 1. példában ismertetett eljárással analóg módon Streptomycesdimorphogenes sp. NR—320—OM7HBS (FERM— 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
