181434. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív FR-900156 anyag előállítására
13 181434 14 6. táblázat Dózis (pg/ml) IF-titer lU/ml 100 14 10 16 1 10 0 <6,5 7. Akut toxicitás egerekben 1 g/kg intravénásán adagolva nem toxikus. 8. Sejttoxicitás L egérsejtekben 500 pg/ml nem okoz toxikus hatást. A találmány szerinti FR—900156 vegyületet és gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóit terápiás adagoláshoz többféle alakban kiszerelhetjük, például előállíthatunk olyan gyógyszerészeti készítményt, amely a találmány szerinti aktív vegyületet nem toxikus, gyógyszerészeti szempontból elfogadható vivőanyaggal együtt tartalmazza. Az FR—900156 jelű vegyület gyógyszerészeti szempontból elfogadható sója lehet szervetlen vagy szerves bázissal alkotott só, például nátriumsó, káliumsó, kalciumsó, ammóniumsó, etanol-aminsó, trietilaminsó, diciklo-hexil-aminsó és más hasonló; lehet savaddíciós só, amely szerves vagy szervetlen savval keletkezett, például hangyasavas só, ecetsavas só, para-toluol-szulfonsavas só, citromsavas só, borkősavas só, hidrogén-kloridos só, kénsavas só, foszforsavas só és mások. A találmány szerinti gyógyszerészeti készítményt gyógyszerészeti preparátum alakjában használhatjuk, például szilárd, félszilárd vagy folyékony alakban, amely készítmények a találmány szerinti aktív vegyületet tartalmazzák szerves vagy szervetlen vivőanyaggal, vagy hígítóanyaggal együtt oly módon, hogy alkalmas legyen külső, belső vagy parenterális adagolásra. A hatóanyagot keverhetjük például a szokásosan használt nem toxikus, gyógyszerészeti szempontból elfogadható vivőanyagokkal, tabletták, kapszulák, szuppozitóriumok, oldatok, emulziók, szuszpenziók és más előnyös gyógyszerészeti készítmények előállítására. Vivőanyagként használhatunk vizet, glükózt, laktózt, akáciagumit, zselatint, mannitot, keményítőpasztát, magnézium-triszilikátot, talkumot, kukoricakeményítőt, keratint, kolloid szilícium-dioxidot, burgonyakeményítőt, karbamidot és más szilárd, félszilárd vagy folyékony alakú előnyös vivőanyagot. Kiegészíthetjük a készítményt segédanyagokkal, stabilizálószerekkel, keményítő- és színezőanyagokkal, továbbá szagosítókkal. A gyógyszerészeti készítmények tartalmazhatnak konzerválószereket vagy bakteriosztatikus hatású anyagokat abból a célból, hogy a készítmény aktivitása stabilan megmaradjon. A hatásos összetevő a gyógyszerészeti készítményben olyan mennyiségben van jelen, hogy a kívánt terápiás hatást elérjük, a betegségtől függően. A készítményt embernek előnyösen intravénásán, intramuszkulárisan vagy orálisan adagoljuk. A találmány szerinti vegyület dózisa vagy terápiásán hatásos mennyisége a kezelendő egyes betegek korától és állapotától függ, a napi dózis általában az ember vagy az állat testsúlykilogrammjára számítva 2 mg és 100 mg között változik, általában egy átlagos dózist adagolunk, amely 50 mg, 100 mg, 250 mg vagy 500 mg hatóanyagnak felel meg. A találmány szerinti eljárást a továbbiakban példákkal szemléltetjük. 1. példa Az alábbi összetételű vegetatív, 7,0 pH-jú táptalajt állítjuk elő: Oldható keményítő 2% Rizsliszt 1% Száraz élesztő 1% Kukorica lekvár 1% Csapvíz (1. vegetatív táptalaj) 100 ml fenti összetételű vegetatív táptalajt tíz, 500 ml térfogatú lombikokban ismert módon sterilizálunk, majd mind a tíz táptalajt egy-egy kacsnyi tenyészettel oltunk be, amit a Streptomyces olivaceogriseus ATCC 31427 mikroorganizmus ferdeagar tenyészetéről nyertünk. A tenyészeteket 30 C° hőmérsékleten 48 órán át rázógépen rázzuk. 30 liter össztérfogatú tankfermentorba 20 liter vegetatív táptalajt (2. táptalaj) töltünk, amelynek összetétele a következő: Oldható keményítő 2% Gyapotmagliszt 0,5% Rizsliszt 0,5% Száraz élesztő 0,5% Kukorica lekvár 0,5% Csapvíz A vegetatív 2. táptalaj pH-ját 7,0-re állítjuk be, majd ismert módon sterilizáljuk, és steril körülmények között beoltjuk a fentiek szerint előállított vegetatív inokulum tenyészettel. 24 órán át 30 C° hőmérsékleten folytatjuk a tenyésztést. A fentiek szerint előállított vegetatív inokulummal sterilen 2000 liter térfogatú 1600 liter fermentációs táptalajt tartalmazó fermentort oltunk. A fermentációs táptalaj összetétele a következő: Oldható keményítő 2% Gyapotmagliszt 0,5% Gabonacsíra 0,5% Szárított élesztő 0,25% Kukorica lekvár 0,25% Kálium-dihidrogén-foszfát 0,5% Nátrium-hidrogén-foszfát x 12H20 0,5% Kobalt(II)-klorid x 6 H20 1,25 mg/1 Csapvíz A tenyésztést 72 órán 30 C° hőmérsékleten folytatjuk. A növekedési szakasz alatt a táptalajt percenként 170-et forduló keverővei kevertetjük, és percenként 16001 steril levegőt vezetünk át a táptalajon. A fermentáció végén 20 kg Radiolite (kereskedelmi név a Showa Chemical Company, Japán) szűrési segédanyagot adunk a tenyészethez, majd a micéliumok eltávolítására szűrjük. Az 1600 1 térfogatú szűrletet 800 1 aktivált szénnel töltött oszlopon vezetjük át, amit ezt követően 1600 1 vízzel mosunk. Az eluálást 3001 50%-os vizes acetonnal végezzük, az eluátumot ezután 600 1 térfogatúra töményítjük. A sűrítményt 2001 DEAE-Sephadex gyantával (kereskedelmi név Pharmacia A. B.) töltött oszlopon vezetjük át, a gyantát előzőleg 6,0 pH-jú foszfát-pufferral pufferoltuk. 2001 vízzel és ezt követően 20010,1 M nátrium-klorid oldattal mossuk az oszlopot, az eluálást 4001 0,3 M nátrium-klorid oldattal végezzük. A vizes eluátumot 2001 aktív szénből készült oszlopon kromatografáljuk, 2001 vízzel mossuk az oszlopot, és ezt követően a hatóanyagot 4001 50%-os vizes acetonnal eluáljuk. Az eluátumot koncentráljuk, és fagyasztva szárítjuk, amiután 800 g fehér színű poralakú terméket kapunk. A poralakú terméket 25 vízben old5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
